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微生物学通报

海洋破囊壶菌Δ4-脂肪酸脱饱和酶基因在酿酒酵母中的表达
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国家自然科学基金项目(No.30370028),福建省科技厅重大项目(No.2003F005)


Expression of Thraustochytrium sp.FJN-10 Δ4-Desaturase Gene in Saccharomyces cerevisiae
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    摘要:

    以质粒pGEM-TFAD4为模板,扩增获得1.6 kb的Δ4-脂肪酸脱饱和酶基因(FAD4)。将FAD4酶切后连接到HindⅢ/XbaⅠ处理过的pYES2.0载体,构建重组表达质粒pYFAD4。转化酿酒酵母缺陷型菌INVScl,通过SC-U选择性培养基筛选阳性克隆子。添加外源脂肪酸C22:5底物,半乳糖诱导表达。气相色谱分析表明阳性克隆子总脂肪酸中出现了二十二碳六烯酸C22:6(占酵母总脂肪含量的41.13%),Δ4-脂肪酸脱饱和酶基因在酿酒酵母中得到了表达。

    Abstract:

    1.6 kb Δ4-desaturase gene(FAD4)was amplified by PCR using plasmid pGEM-TFAD4 as template. The fragment was subcloned into the HindⅢ/XbaⅠrestriction site of pYES2.0 vector. Recombinant plasmid pYFAD4 was transformed into Saccharomyces cerevisiae strain INVScl for expression.It was found to exhibit Δ4-fatty acid desaturase activity in the recombinant S.cerevisiae YFAD4 in the presence of exogenous fatty acid substrate docosapentaenoic acid(100μmol/L)under introduction of GAL1.Expression of the FAD4 under appropriate media and temperature conditions led to the production of DHA and it reached 41.13% of the total yeast fatty acid by GC detection.It was suggested that the protein encoded by FAD4 could specifically catalyze DPA into DHA.

    参考文献
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    引证文献
引用本文

陈金卿,江贤章,刘丽霞,黄建忠. 海洋破囊壶菌Δ4-脂肪酸脱饱和酶基因在酿酒酵母中的表达[J]. 微生物学通报, 2007, 34(6): 1154-1157

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