利用大肠杆菌载体pET 2 8a和穿梭载体 pHY30 0PL构建了敲除载体 pHK ,通过DNA变性技术和同源重组技术成功地敲除了整合型碱性蛋白酶基因工程菌BP0 71中的卡那霉素抗性基因 (Kanr) ,得到 11株敲除卡那霉素抗性基因的阳性克隆 ,并使产酶水平保持稳定。该方法的建立为基因敲除技术在工业微生物研究中应用提供了经验 ,并为微生物来源的转基因产品安全性的研究提供了模型。