角蛋白酶基因gm2886在密旋链霉菌ACT12中的表达及鉴定
作者:
作者单位:

作者简介:

通讯作者:

中图分类号:

基金项目:

陕西省农业科技创新与攻关 (No. 2015NY066),上海交通大学微生物代谢国家重点实验室开放基金 (No. MMLKF14-09),中央高校基本科研业务费 (Nos. Z109021426,Z109021432),国家自然科学基金 (No. 31601700) 资助。


Expression and characterization of a keratinase encoding gene gm2886 in Streptomyces pactum ACT12 strain
Author:
Affiliation:

Fund Project:

Science Technology Research and Development Program of Shaanxi Province (No. 2015NY066), State Key Laboratory of Microbial Metabolism, Shanghai Jiao Tong University (No. MMLKF14-09), Fundamental Research Funds for the Central Universities (Nos. Z109021426, Z109021432), National Natural Science Foundation of China (No. 31601700).

  • 摘要
  • |
  • 图/表
  • |
  • 访问统计
  • |
  • 参考文献
  • |
  • 相似文献
  • |
  • 引证文献
  • |
  • 资源附件
  • |
  • 文章评论
    摘要:

    通过生物信息学分析,在本实验室分离得到的1株羽毛高效降解菌微白黄链霉菌Fea-10基因组中发现基因gm2886 (GenBank Accession Number: KY368946) 可能编码一新的角蛋白酶,通过在该基因5'端和3'端分别连接红霉素抗性基因启动子 (PermE) 和组氨酸标签编码序列并构建在大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒pSET152上,接合转入密旋链霉菌Streptomyces pactum ACT12,从而实现了异源表达,蛋白纯化后对其酶学性质进行了研究。实验结果表明,带有组氨酸标签编码序列的gm2886在密旋链霉菌ACT12中可以表达分泌得到1个大小约为36 kDa的蛋白。多种底物检测表明异源表达得到的重组蛋白GM2886-His6具有蛋白酶活性,可以降解水不溶性的天青角蛋白和羽毛粉;其最适温度和pH分别为50 ℃和pH 10.0。PMSF可抑制GM2886-His6的酶活,而EDTA不能,说明该酶为丝氨酸蛋白酶。本研究为从分子水平上解析羽毛高效降解菌Fea-10的活性机理,从而进一步开发其应用潜力提供了基础,同时可为该类蛋白酶的研究提供借鉴。

    Abstract:

    By bioinformatics analysis, a putative keratinase gene gm2886 (Accession number: KY368946) was discovered in the genome of a feather-degrading strain, Streptomyces albidoflavus Fea-10. gm2886 was ligated into integrative Escherichia coli-Streptomyces shuttle vector pSET152 under the promoter PermE and added with C-terminal His-tag. The expression vector was transformed into Streptomyces pactum ACT12 by conjugal transfer and the recombinant protein GM2886-His6 was detected in fermentation broth. GM2886-His6 was purified and characterized. Its size was nearly 36 kDa. GM2886-His6 showed proteolytic activity towards a variety of substrates and could even degrade insoluble substrates, such as azure keratin and chicken feathers. The optimal pH and temperature of GM2886-His6 for proteolysis of casein was pH 10.0 and 50 ℃, respectively. The enzyme activity was inhibited by PMSF, but not EDTA, indicating that GM2886-His6 was a serine proteinase. Our results laid the foundation for the research of the molecular biological mechanism on feather-degrading and for the further utilization of Fea-10.

    参考文献
    相似文献
    引证文献
引用本文

马怡茗,柯欣,李晓霞,舒伟学,杨文翰,刘亚勇,颜霞,贾良辉,颜华. 角蛋白酶基因gm2886在密旋链霉菌ACT12中的表达及鉴定[J]. 生物工程学报, 2017, 33(12): 1968-1978

复制
分享
文章指标
  • 点击次数:
  • 下载次数:
  • HTML阅读次数:
  • 引用次数:
历史
  • 收稿日期:2017-03-01
  • 最后修改日期:
  • 录用日期:
  • 在线发布日期: 2017-12-22
  • 出版日期:
您是第位访问者
生物工程学报 ® 2024 版权所有

通信地址:中国科学院微生物研究所    邮编:100101

电话:010-64807509   E-mail:cjb@im.ac.cn

技术支持:北京勤云科技发展有限公司