人溶酶体酸性b-葡萄糖脑苷脂酶基因的克隆及其在COS7细胞中的表达
DOI:
作者:
作者单位:

作者简介:

通讯作者:

中图分类号:

基金项目:

国家转基因生物新品种培育重大专项(No. 2008ZX08008-004), 江苏省国际合作项目(No. BZ2007065)资助。


Cloning of human lysosomal acid b-glucosidase gene and its expression in COS7 cells
Author:
Affiliation:

Fund Project:

the National Major Special Project on New Varieties Cultivation for Transgenic Organisms (No. 2008ZX08008-004), the International Cooperation Project of Jiangsu Province (No. BZ2007065).

  • 摘要
  • |
  • 图/表
  • |
  • 访问统计
  • |
  • 参考文献
  • |
  • 相似文献
  • |
  • 引证文献
  • |
  • 资源附件
  • |
  • 文章评论
    摘要:

    从人胎盘组织提取总RNA, 采用RT-PCR扩增人溶酶体酸性b-葡萄糖脑苷脂酶(Lysosomal acid b-glucosidase, GlcCerase)基因编码区的全部序列, 并克隆到pMD-19T载体上, 构建克隆载体pMD-GlcCerase。经测序验证后, 将GlcCerase亚克隆至表达载体pEGFP-C1上, 构建了人GlcCerase绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-GlcCerase。采用脂质体法将其瞬时转染至COS7细胞系后, 在细胞中检测到了GlcCerase基因, 并在细胞裂解产物中检测到了GlcCerase生物活性的表达。GlcCerase基因的克隆及其表达, 为进一步了解GlcCerase基因的功能以及利用转基因动物乳腺生物反应器高效生产GlcCerase奠定了基础。

    Abstract:

    In this study, we amplified human lysosomal acid b-glucosidase (GlcCerase) gene by RT-PCR from human placenta, and analyzed the sequence of the PCR product cloned in pMD-19T. The gene identity was 99% comparable to that of the reported human GlcCerase cDNA sequence in GenBank. The GlcCerase gene digested with Xho I was subcloned into eukaryotic express vector pEGFP-C1 to generate recombinant expression vector pEGFP-GlcCerase. After identified the recombinant plasmid by restriction enzyme digestion, we transfected pEGFP-GlcCerase into COS7 cells by liposome. GlcCerase mRNA was expressed and the activity of GlcCerase was also detected in COS7 cells. This study would lay a foundation for the function of GlcCerase and its production by transgenic bioreactor.

    参考文献
    相似文献
    引证文献
引用本文

张艳丽,许丹,王子玉,孟立,王锋. 人溶酶体酸性b-葡萄糖脑苷脂酶基因的克隆及其在COS7细胞中的表达[J]. 生物工程学报, 2009, 25(2): 263-267

复制
分享
文章指标
  • 点击次数:
  • 下载次数:
  • HTML阅读次数:
  • 引用次数:
历史
  • 收稿日期:2008-09-03
  • 最后修改日期:
  • 录用日期:
  • 在线发布日期:
  • 出版日期:
您是第位访问者
生物工程学报 ® 2024 版权所有

通信地址:中国科学院微生物研究所    邮编:100101

电话:010-64807509   E-mail:cjb@im.ac.cn

技术支持:北京勤云科技发展有限公司