酿酒酵母超氧物歧化酶(SOD)基因的克隆和表达
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    通过PCR扩增技术从酿酒酵母中得到了Cu,zn—SOD的结构基因,此基因被亚克隆到大肠杆菌质粒载体pT7—7.得到重组质粒pT7-7:SOD。利用EcoRI和Pstl酶切pT7-7::SOD质粒.经琼脂糖凝腔电泳,DEAE-滤膜回收Cu。zn—SOD结构基因片段,将其亚克隆到M13中.并转化大肠杆菌,得到了重组质粒M13-::t SOD,酶切和纯化后的SOD基因,定向克隆到酵母质粒载体pHz-8的smal和EcoRI位点上,构建成重组质粒pHZ-8-l。经转化酵母受体菌ZH-l和DP—l后得到了转化子.来自于ZH—l的转化子在非选择性条件下培养40世代后仍有95%以上细胞保留重组质粒。而来自于DP-1的转化子很不稳定。经蛋白提取、聚丙烯酰胺凝胶电泳和酶活性测定结果表明,来自于zH-1转化子中SOD的表达量约为细胞可溶性蛋白的15%.并具有生物活性。

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引用本文

张博润 黄英 田宇清谭华荣. 酿酒酵母超氧物歧化酶(SOD)基因的克隆和表达[J]. 生物工程学报, 1995, 11(1):

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