用人工合成的α－肿瘤坏死因子(TNF—α)基因构建了五个不同的表达质粒，它们不同之处是SD序列与起始密码子ATG问距离(D)各异．计算机模拟计算出翻译起始区域(TIR)中二级结构的最小生成自由能．以(D)为6个核苷酸时最小(绝对值)。它的表达效率也最高，产物TNF—α可达菌体总蛋白的60％．密码子的选用对表达效率有很大的影响，故人工合成TNF－α基因(选用大肠杆菌偏爱的密码子)的表达效率高于sc－DNA(对部分密码子改造的半合成eDNA)．