克隆了大肠杆菌和霍乱弧菌胸腺嘧啶合成酶基因thyA，并以pcDNA3质粒为基础，分别用两种来源的thyA基因替代其氨苄抗性基因Amp，构建了不含抗性基因，且可在thyA营养缺陷型大肠杆菌中基于染色体-质粒平衡致死系统稳定传代的真核表达载体。该载体可有效表达红色荧光蛋白报告基因。为核酸疫苗的制备提供一个无抗性的表达载体系统。