碱性蛋白酶工程菌发酵条件及重组酶的纯化和性质的研究
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    在5L发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株BP071高产碱性蛋白酶的条件进行了研究,通过提高通气量和改变搅拌转速,BP071可在发酵40 h内达到产酶高峰,酶活力最高可达24480 u/mL。利用快速蛋白液相层析(FPLC)技术,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸铵沉淀、DEAE-A-50脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶,再经过CM-Sephadex-C-50、Sephadex-G-75柱层析后得到了单一组份的重组碱性蛋白酶,酶纯度提高了76.2倍。SDS-PAGE显示重组碱性蛋白酶分子量为28 kD。酶学性质研究表明,酶的最适作用pH为11,最适作用温度为60℃,具有良好的pH稳定性和热稳定性。Ca2+、Mg2+对酶的稳定性有促进作用,Hg2+、Ag+、PMFS和DFP能强烈抑制酶的活力。SDS和Urea对酶的活力无影响。

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引用本文

唐雪明 王正祥 邵蔚蓝 刘吉泉 方慧英 诸葛健. 碱性蛋白酶工程菌发酵条件及重组酶的纯化和性质的研究[J]. 生物工程学报, 2002, 18(6):

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