λpL/pR-cI857温控系统的改造及其对大肠杆菌菌蜕制备的影响
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国家自然科学基金 (Nos. 31001078,31072161,30871851) 资助。


Mutation of λpL/pR-cI857 system for production of bacterial ghost in Escherichia coli
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Fund Project:

National Natural Science Foundation of China (Nos. 31001078, 31072161, 30871851).

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    摘要:

    菌蜕是革兰氏阴性菌在噬菌体Phix174的溶菌基因E的作用下形成的细菌空壳,通常由λpL/pR-cI857温控系统通过调控E基因的表达制备。通过重叠PCR技术,将λpL/pR-cI857温控系统中λpR启动子的第2个操纵基因 (OR2) 的第9位碱基由T突变为C (T→C)。溶菌试验结果表明,突变后的λpL/pR-cI857系统在37 ℃时仍能稳定抑制基因E的表达,对大肠杆菌的溶菌率为99.9%。通过对λpR启动子的改造,扩大了λpL/pR-cI857温控系统的温度调控范围,为菌蜕疫苗的研制提供了参考。

    Abstract:

    Bacterial ghost is intact envelope of Gram-negative bacteria, which is produced by the function of the lysis gene E from bacteriophage PhiX174. The expression of the lysis gene E is usually controlled by the thermosensitive λpL/pR-cI857 promoter. In this study, we described a mutation (T→C) at the ninth nucleotide of the OR2 in the λpR promoter of the λpL/pR-cI857 system by overlap PCR. The bacteriolytic assay showed that the mutation in the λpL/pR-cI857 system enhanced the temperature of repressing the expression of gene E up to 37 ℃. The lysis efficiency of altered λpR promoter in Escherichia coli DH5α and avian pathogenic E. coli DE17 was up to 99.9%. The expanded range of temperature will benefit for the production of bacterial ghost.

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引用本文

董洪亮,韩先干,白灏,何亮,刘蕾,刘瑞,柴同杰,丁铲,刘海文,于圣青. λpL/pR-cI857温控系统的改造及其对大肠杆菌菌蜕制备的影响[J]. 生物工程学报, 2012, 28(12): 1423-1430

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  • 收稿日期:2012-08-04
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  • 在线发布日期: 2013-01-06
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