本文报道了幼畜腹泻双价基因工程疫苗(K88、K99)的高密度发酵生产工艺和抗原基因的过量表达研究结果。采用New Biunswick公司发酵罐，主要发酵参数为搅拌速度1000rpm，通气量为18L／min，溶氧为25％，pH6．5，罐压为48．3kPa，温度37℃，发酵时间为20h。菌体浓度为A 6 0 0 nm40以上，K88、K99抗原效价分别达212水平。发酵过程中发现表达的抗原除装配细菌伞毛之外，过量表达的抗原以相当于伞毛中抗原浓度游离存在于溶液中。含双价疫苗基因的表选型质粒的稳定性在发酵20h后保持在70％。本文结果表明利用小型发酵罐(10L发酵液)每次可制备10000支疫苗，完全可以满足对幼畜腹泻基因工程疫苗盼大量需要。