抗对虾白斑综合症病毒单链抗体P1D3基因在毕赤酵母中的分泌表达
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    为了将可中和对虾白斑综合症病毒(WSSV)的单链抗体P1D3在酵母中实现表达,以原核表达载体M13噬菌粒为模板,设计带有SnaBⅠ和EcoRⅠ酶切位点的特异性引物,通过PCR方法扩增P1D3基因。经过酶切、连接反应将该基因连入大肠杆菌酵母穿梭质粒pPIC9K上。重组质粒pPIC9K-scFvP1D3 经 BglⅡ线性化后,用电转化的方法转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中。通过PCR和DNA测序,挑选和鉴定阳性克隆。经甲醇诱导,P1D3在酵母中获得分泌表达。ELISA实验结果表明,酵母表达上清液中的单链抗体具有较高的WSSV结合活性,而且其活性要高于大肠杆菌所表达抗体的活性。表达条件优化后,单链抗体在酵母中最高表达量可达302mg/L,为开展对虾被动免疫研究提供了新的抗体来源。

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杨毅 张敏 袁丽 张晓华 戴和平. 抗对虾白斑综合症病毒单链抗体P1D3基因在毕赤酵母中的分泌表达[J]. 生物工程学报, 2006, 22(6):

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