| 里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ在毕赤酵母中的高效表达 |
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| 中文关键词:纤维素酶 整合表达 液质联用 羧甲基纤维素 |
| 英文关键词: |
| 基金项目: |
| 张煜 $2 余少文 汤新 $2* |
| 深圳大学生命科学学院,深圳市微生物基因工程重点实验室 |
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| 中文摘要: |
| 本工作采用巴氏毕赤酵母Pichiapastoris表达系统进行了里氏木霉Trichodermareesei纤维二糖水解酶Ⅱ(CellobiohydrolaseII)的表达。用RT-PCR的方法从经稻草粉诱导的里氏木霉培养物中分离出纤维二糖水解酶Ⅱ的基因,将其插入到巴氏毕赤酵母的表达载体pPICZαA中,并使之处于α-因子信号肽序列的下游,得到重组质粒pPICZαA-cbh2。通过电穿孔的方法用线性化的pPICZαA-cbh2转化巴氏毕赤酵母GS115菌株,经过大量筛选后得到可以高效表达纤维二糖水解酶的毕赤酵母菌株P.pastorisCBHⅡ1。在甲醇诱导的条件下培养P.pastoris<.I>CBHⅡ1,培养液中的CMC活性可达到3.82U/mL,SDS-PAGE分析结果表明纤维二糖水解酶在P.pastorisCBHⅡ1中的表达量远远高于里氏木霉。对表达产物进行了LC-MS分析,结果表明所表达的蛋白为里氏木霉的纤维二糖水解酶。 |
| 英文摘要: |
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| 张煜,$2,余少文,汤新,$2. 里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ在毕赤酵母中的高效表达[J]. 菌物学报, 2005, 24(3): |
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