用λZAPExpress作载体构建金针菇子实体表达型cDNA文库*
  
中文关键词:滴度  重组率  免疫筛选
英文关键词:
基金项目:
周凯松  常宁  彭俊峰  张晗星  张长铠**
山东大学微生物技术国家重点实验室
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中文摘要:
      采用QuickPrepmicromRNAPurification试剂盒从新鲜金针菇子实体中快速提取、纯化mRNA,TimeSavercDNASynthesis试剂盒逆转录成cDNA分子后,通过在cDNA分子两端加上EcoRⅠ/NotⅠ接头,在T4多核苷酸激酶的作用下磷酸化,与表达载体λZAPExpressPredigestedVector连接,然后用包装蛋白在体外包装连接产物,感染E.coliXL1-BlueMRF捁菇ǔ杀泶颿DNA文库。经检测:文库滴度为4.0×106pfu/ml,文库扩增后,滴度达2.0×1010pfu/ml,重组率为90%,cDNA分子长度在0.3-3.5Kb范围。应用原位免疫杂交,初步筛选出火菇素相关基因的阳性克隆。
英文摘要:
      
周凯松,常宁,彭俊峰,张晗星,张长铠. 用λZAPExpress作载体构建金针菇子实体表达型cDNA文库*[J]. 菌物学报, 2003, 22(1):
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