采自文冠果葡萄座腔菌科的4个新记录种

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许蓉, 谢孟乐, 苏文鑫, 田上卿, 李玉, Chayanard Phukhamsakda

XU Rong, XIE Mengle, SU Wenxin, TIAN Shangqing, LI Yu, Chayanard Phukhamsakda

采自文冠果葡萄座腔菌科的4个新记录种

Four new records of botryosphaerialean fungi from Xanthoceras sorbifolium

微生物学通报, 2024, 51(6): 2065-2080

Microbiology China, 2024, 51(6): 2065-2080

DOI: 10.13344/j.microbiol.china.230855

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收稿日期: 2023-10-17

接受日期: 2023-11-25

网络首发日期: 2024-01-05

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许蓉, 谢孟乐, 苏文鑫, 田上卿, 李玉, Chayanard Phukhamsakda. 采自文冠果葡萄座腔菌科的4个新记录种[J]. 微生物学通报, 2024, 51(6): 2065-2080.

XU Rong, XIE Mengle, SU Wenxin, TIAN Shangqing, LI Yu, Chayanard Phukhamsakda. Four new records of botryosphaerialean fungi from Xanthoceras sorbifolium[J]. Microbiology China, 2024, 51(6): 2065-2080.

采自文冠果葡萄座腔菌科的4个新记录种

许蓉^1,2 , 谢孟乐¹ , 苏文鑫² , 田上卿² , 李玉² , Chayanard Phukhamsakda^2,3

1. 扬州大学食品科学与工程学院, 江苏扬州 225127;
2. 吉林农业大学食药用菌教育部工程研究中心, 吉林长春 130118;
3. Center of Excellence in Fungal Research, Mae Fah Luang University, Chiang Rai 57100, Thailand

收稿日期: 2023-10-17; 接受日期: 2023-11-25; 网络首发日期: 2024-01-05

基金项目: 国家自然科学基金(32100007)

摘要: 【背景】 葡萄座腔菌科(Botryosphaeriaceae)真菌多为农业和林业上的主要病原菌。【目的】 对吉林省长春市和四平市的文冠果微型子囊菌进行资源调查。【方法】 采集标本，结合形态特征、培养特性对其进行详细的形态学描述；提取DNA，测定内转录间隔区(internal transcribed spacer, ITS) rDNA、核糖体大亚基(ribosomal large subunit, LSU)和翻译延伸因子-1α (translation elongation factor 1-alpha, tef1-α)序列，基于最大似然(maximum likelihood, ML)法、最大简约(maximum parsimony, MP)法和贝叶斯推导(Bayesian inference, BI)构建分子系统发育树。【结果】 鉴定出4个葡萄座腔菌科物种：中华葡萄座腔菌(Botryosphaeria sinensis)、无隔孢暗葡萄腔菌(Phaeobotryon aplosporum)、楲生暗葡萄腔菌(Phaeobotryon negundinis)和火炬树生暗葡萄腔菌(Phaeobotryon rhois)，4种微型子囊菌在文冠果上均为首次报道。本文给出以上4个新记录种的宏观、微观和菌落形态特征的详细描述及照片。【结论】 楲生暗葡萄腔菌系中国首次报道，中华葡萄座腔菌、无隔孢暗葡萄腔菌和火炬树生暗葡萄腔菌为吉林省新记录种。

关键词: 葡萄座腔菌科文冠果形态分类

Four new records of botryosphaerialean fungi from Xanthoceras sorbifolium

XU Rong^1,2 , XIE Mengle¹ , SU Wenxin² , TIAN Shangqing² , LI Yu² , Chayanard Phukhamsakda^2,3

1. School of Food Science and Engineering, Yangzhou University, Yangzhou 225127, Jiangsu, China;
2. Engineering Research Center of Chinese Ministry of Education for Edible and Medicinal Fungi, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, Jilin, China;
3. Center of Excellence in Fungal Research, Mae Fah Luang University, Chiang Rai 57100, Thailand

Received: 17-10-2023; Accepted: 25-11-2023; Published online: 05-01-2024

Foundation item: This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (32100007)

^*Corresponding author: E-mail: LI Yu, yuli966@126.com;
E-mail: Chayanard Phukhamsakda, chayanard91@gmail.com.

Abstract: [Background] Fungi of Botryosphaeriaceae are mostly major pathogens in agriculture and forestry. [Objective] To investigate the microfungi of Ascomycota from Xanthoceras sorbifolium in Changchun and Siping of Jilin province. [Methods] The specimens of microfungi were collected, and their morphology was observed and described in detail. After DNA extraction, the internal transcribed spacer (ITS) rDNA, ribosome large subunit (LSU), and translation elongation factor 1-alpha (tef1-α) of each species were sequenced. Phylogenetic trees were constructed based on maximum likelihood method, maximum parsimony method, and Bayesian inference. [Results] Four species of Botryosphaeriaceae were identified as Botryosphaeria sinensis, Phaeobotryon aplosporum, Phaeobotryon negundinis, and Phaeobotryon rhois, respectively. These four species of ascomycetes were reported on Xanthoceras sorbifolium for the first time. This paper described and illustrated the macroscopic, microscopic, and colony morphological characteristics of the above four new record species in detail. [Conclusion] P. negundinis was identified as a new record in China. B. sinensis, P. aplosporum, and P. rhois were identified as new records in Jilin.

Keywords: Botryosphaeriaceae Xanthoceras sorbifolium morphology taxonomy

文冠果(Xanthoceras sorbifolium Bunge)为无患子科(Sapindaceae)、文冠果属植物，又名崖木瓜、僧灯毛道、温旦革子，属于灌木或小乔木，是中国北方特有树种，主要分布于华北、东北、西北等地区，因其具有耐寒、耐旱、耐贫瘠等特点，常被用于水土保护、造林绿化和防风固沙等方面^[1]。同时，作为油料树种，文冠果种仁含油量高达66%，富含的植物源神经酸对心血管和自身免疫疾病有良好的效果^[2]，其中亚油酸是中药益寿宁的主要成分，具有降血压的作用。然而，目前文冠果上的微型子囊菌鲜有研究，只有零星报道^[3-4]，其真菌多样性及种质资源仍有待挖掘。

葡萄座腔菌科(Botryosphaeriaceae)由Theissen和Sydow于1918建立，葡萄座腔菌属(Botryosphaeria)为模式属^[5]。该科真菌多为农业和林业上主要的病原菌，主要引起树木溃疡病；也有生于腐烂植物的腐生菌，或与植物共生的内生真菌^[6-12]。葡萄座腔菌科真菌可寄生于多种寄主植物，在世界各地均有分布^[13-17]。目前，葡萄座腔菌科共包含22属，其中葡萄座腔菌属(Botryosphaeria)是引起多种果树和林木枝干溃疡病和果实腐烂病的病原菌，在河南、河北、北京、天津、辽宁、山东、山西、陕西、江西、贵州、江苏、安徽、浙江、湖北、福建等地常有报道；其寄主范围较广，常见寄主有苹果、梨、桃、柑橘、葡萄、蓝莓、樱桃、猕猴桃、桉树、茶树、杨树等^[18-31]，但文冠果上尚无该属真菌报道^[3-4]。暗葡萄腔菌属(Phaeobotryon)真菌于2015年在中国首次报道，引起鹿角漆树(Rhus typhina)枯死病和溃疡病^[32]。截至2023年，在我国北京市怀柔区、门头沟区、延庆区及宁夏回族自治区银川市共记录4种暗葡萄腔菌属真菌：Phaeobotryon aplosporum^[33]、P. rhoinum^[34]、P. rhois^[32]和P. spiraeae^[35]，寄主分别为绣线菊(Spiraea salicifolia)、鹿角漆树(Rhus typhina)、丁香(Syzygium aromaticum)、穿龙薯蓣(Dioscorea nipponica)、侧柏(Platycladus orientalis)和鼠李(Rhamnus davurica)。

本研究对在吉林省长春市和四平市采集获得的文冠果枝干标本进行分类学鉴定，旨在明确吉林省文冠果微型子囊菌物种资源多样性及分布特性，以期为微型子囊菌资源利用和保护提供重要理论依据和经验积累。

1 材料与方法 1.1 样品

文冠果枯枝采自吉林省长春市吉林农业大学校园内及吉林省四平市梨树县国有林总场文冠果种植基地，均保存于吉林农业大学菌物标本馆(The Herbarium of Mycology, Jilin Agricultural University, HMJAU)。采用单孢分离法获得纯培养物^[36]，挑取萌发的孢子转移至PDA培养基中，于25 ℃黑暗条件下培养，分离纯化后的菌株保存于吉林农业大学食药用菌教育部工程研究中心(The International Cooperation Research Center of China for New Germplasm Breeding of Edible Mushrooms Culture Collection, CCMJ)。

1.2 培养基

PDA培养基(g/L)：马铃薯200.0，葡萄糖20.0，琼脂粉16.0，121 ℃灭菌30 min。

1.3 主要试剂和仪器

基因组DNA提取试剂盒和2×Es Taq Master Mix (Dye)，江苏康为世纪生物科技股份有限公司。立体显微镜和光学显微镜，卡尔蔡司光学(中国)有限公司；PCR仪，Bio-Rad公司。

1.4 形态学特征

使用立体显微镜观察子囊果和分生孢子器的形态特征。显微结构的观察是以蒸馏水为浮载剂进行手工切片，使用光学显微镜对子囊、子囊孢子、产孢细胞及分生孢子的形态、颜色、表面纹饰、大小等特征进行观察并拍照。

1.5 分子系统学特征

分离纯化获得的菌株于25 ℃培养2周后，利用基因组DNA提取试剂盒提取基因组总DNA，扩增内转录间隔区(internal transcribed spacer, ITS)、核糖体大亚基(ribosomal large subunit, LSU)和翻译延伸因子(translation elongation factor 1-alpha, tef1-α)，所用引物序列如表 1所示。PCR反应体系：上、下游引物(10 μmol/L) 0.3 μL，2×Es Taq Master Mix (Dye) 10 μL，模板(10 ng/μL) 1 μL，无菌水补足20 μL。PCR反应条件(ITS/LSU/tef1-α)：94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，53 ℃ 45 s，72 ℃ 90 s，35个循环；72 ℃ 10 min。PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测，确认合格后由生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序。

表 1　本研究中采用的PCR引物 Table 1　The PCR primers used in this study

引物 Primer	引物序列 Primer sequence (5′→3′)	参考文献 Reference
ITS
ITS4	TCCTCCGCTTATTGATATGC	[37]
ITS5	GGTGAGAGATTTCTGTGC
LSU
LR0R	ACCCGCTGAACTTAAGC	[38]
LR5	ATCCTGAGGGAAACTTC
tef1-α
688F	CGGTCACTTGATCTACAAGTGC	[39]
1251R	CCTCGAACTCACCAGTACCG

表选项

使用BioEdit v.7.2.5^[40]读取测序所获得的序列峰图，将自测序列在NCBI公共数据库(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)进行BLAST在线比对，选取并下载同源序列。使用MAFFT v7.0 (https://mafft.cbrc.jp/alignment/server)对序列进行自动对齐^[41]，并用AliView软件手动矫正无法对齐的序列^[42]。利用PAUP 4.0进行最大简约(maximum parsimony, MP)分析^[43]，在CIPRES门户网站上分别使用RAxML-HPC2和MrBayes v3.2.6进行最大似然(maximum likelihood, ML)分析^[44-45]和贝叶斯推导(Bayesian inference, BI)分析^[46]。使用FigTree v1.4软件(http://tree.bio.ed.ac.uk/software/fgtree/)构建系统发育树。

2 结果与分析 2.1 中华葡萄座腔菌Botryosphaeria sinensis Y.P. Zhou & Y. Zhang ter in Phytotaxa 245(1): 45 (2016).

形态见图 1、图 2，系统学位置见图 3。

图 1　中华葡萄座腔菌的有性型形态图(HMJAU 64805) Figure 1　Sexual morphology of Botryosphaeria sinensis (HMJAU 64805). A–C：文冠果枯枝上的子囊果. D：子囊果的纵切面. E：子囊果的壁. F：拟侧丝. G–J：子囊. K–N：子囊孢子. O：中华葡萄座腔文冠果枯枝上的子囊果菌在PDA上的培养形态(左侧培养4 d，右侧培养20 d). 标尺：D为200 μm；H–J为50 μm；E–G和K–N为20 μm A–C: Appearance of ascomata on host substrate. D: Vertical section of ascomata. E: Partial peridium wall. F: Pseudoparaphyses. G–J: Asci. K–N: Ascospores. O: Culture characteristics on PDA after 4 d (left) and 20 d (right). Scale bars: D, 200 μm; H–J, 50 μm; E–G and K–N, 20 μm.

图选项

图 2　中华葡萄座腔菌的无性型形态图(HMJAU 64804) Figure 2　Asexual morphology of Botryosphaeria sinensis (HMJAU 64804). A和B：文冠果枯枝上的分生孢子器. C：分生孢子器的纵切面. D：分生孢子器的壁. E–I：产孢细胞及分生孢子. J–Q：分生孢子. R：中华葡萄座腔菌在PDA上的培养形态(左侧培养4 d，右侧培养20 d). 标尺：C为200 μm；D、G–I为50 μm；E、F和J–Q为20 μm A and B: Appearance of conidiomata on host substrate. C: Vertical section of conidiomata. D: Section of conidioma wall. E–I: Conidiogenous cells and conidia. J–Q: Conidia. R: Culture characteristics on PDA after 4 d (left) and 20 d (right). Scale bars: C, 200 μm; D and G–I, 50 μm; E–F and J–Q, 20 μm.

图选项

图 3　基于ITS+LSU+tef1-α序列的葡萄座腔菌属系统发育树最大似然法支持率≥70%、最大简约法支持率≥70%及贝叶斯后验概率≥0.9标示在分支节点 Figure 3　Phylogenetic analysis of Botryosphaeria based on ITS, LSU and tef1-α genes. Maximum likelihood bootstrap support values ≥70% (ML), maximum parsimony bootstrap support values ≥70% (MP) and Bayesian posterior probabilities ≥0.9 (BYPP) are given at the nodes as ML/MP/BYPP.

图选项

有性型：腐生于文冠果枯枝上，子囊果半埋生，成熟后撑破枝干表皮；子囊果(204–240) µm×(178–242) µm ($\bar x$=219 µm×205 µm, n=5)，球形至近球形，聚生或单生，褐色至黑色，具孔口；包被厚28–71 µm，类皮质，由5–12层细胞组织构成，外层组织由深棕色、胞壁较厚的细胞按照角胞组织的形式排列构成，由外向内细胞着色变浅且胞壁变薄；侧丝宽2–4 µm，有隔膜，在隔膜处收缩，少分枝；子囊(78–120) µm×(12–22) µm ($\bar x$=100.5 µm×18.0 μm, n=20)，具双层囊壁，含8个子囊孢子，宽棍棒状，顶端呈圆形，1–2个孢子连续排列在子囊内；子囊孢子(17–27) µm×(5–12) µm ($\bar x$=22.4 µm×9.5 μm, n=50)，长宽比(L/W=2.4)，梭形至椭圆形，在上三分之一或中部最宽，顶端钝，有时有锥形末端，细胞壁光滑，无色透明，无隔膜，孢子内有颗粒状小球。

无性型：腐生于文冠果枯枝上，半埋生，成熟后撑破枝干表皮，球形至近球形，聚生或单生，褐色至黑色，直径为330–370 µm；子实体包被厚25–41 μm，类皮质，由5–15层浅棕色至深棕色细胞按照角胞组织的形式排列构成，细胞由内向外颜色逐渐变深；分生孢子梗不明显或退化为产孢细胞，产孢细胞(9–32) µm×(1.0–2.7) μm ($\bar x$=18.0 µm×1.8 μm, n=20)，全壁芽生，亚圆柱形，直立或弯曲，无色透明，光滑；分生孢子(18–35) µm×(5.0–8.5) μm ($\bar x$=28.0 µm×7.2 μm, n=50)，长宽比(L/W=3.9)，纺锤形，顶端钝，无色透明，无隔膜，光滑，孢子内有颗粒状小球；成熟后的分生孢子浅棕色，圆柱形，光滑，具1–2个隔膜。

有性型菌落特征：菌落生长速度较快，在PDA培养基上25 ℃条件下培养，生长第4天直径达6 cm。菌落初期呈白色，气生菌丝，边缘整齐；后期菌丝呈墨绿色至黑色，有油滴产生，菌落反面呈放射状，中间呈黑色，边缘菌丝墨绿色。

无性型菌落特征：菌落生长速度一般，在PDA培养基上25 ℃条件下培养，生长4 d直径达3.7 cm。菌落初期呈白色，菌丝稀疏；后期菌丝呈墨绿色至黑色，菌落反面呈放射状，中间呈黑色，边缘菌丝墨绿色。

标本信息：采集时间：2021年8月12日，采集人：许蓉，采集地点：吉林省四平市梨树县国有林总场文冠果科研基地，采自文冠果枯枝，标本号为HMJAU 64804，菌株号为CCMJ 13036 (ITS、LSU和tef1-α的GenBank登录号分别为OQ846791、OQ845867和OQ980395)；采集时间：2021年10月18日；采集人：许蓉；采集地点：吉林省长春市净月潭国家森林公园，采自文冠果枯枝；标本号为HMJAU 64805；菌株号为CCMJ 13037 (ITS、LSU和tef1-αGenBank登录号分别为OQ846792、OQ845868和OQ980396)；采集时间：2021年10月31日；采集人：许蓉；采集地点：吉林省长春市吉林农业大学校园内，采自文冠果枯枝；标本号为HMJAU 64806；菌株号为CCMJ 13038 (ITS、LSU和tef1-α的GenBank登录号分别为OQ846793、OQ845869和OQ980397)。

世界分布：中国。

国内分布：河南省^[31]、贵州省^[18]和吉林省。

2.2 无隔孢暗葡萄腔菌Phaeobotryon aplosporum M. Pan & X.L. Fan in Mycol. Progr. 18(11): 1356 (2019).

形态见图 4，系统学位置见图 5。

图 4　无隔孢暗葡萄腔菌(HMJAU 64807) Figure 4　Morphology of Phaeobotryon aplosporum (HMJAU 64807). A和B：文冠果枯枝上的分生孢子器. C：分生孢子器的纵切面. D：分生孢子器的壁. E–H：产孢细胞及分生孢子. I–L：分生孢子. M：无隔孢暗葡萄腔菌在PDA上的培养形态(左侧培养4 d，右侧培养20 d). 标尺：C为500 μm；D为50 μm；E–L为20 μm A and B: Appearance of conidiomata on host substrate. C: Vertical section of conidiomata. D: Section of conidioma wall. E–H: Conidiogenous cells and conidia. I–L: Conidia. M: Culture characteristics on PDA after 4 d (left) and 20 d (right). Scale bars: C, 500 μm; D, 50 μm; E–L, 20 μm.

图选项

图 5　基于ITS+LSU+tef1-α序列的暗葡萄腔菌属系统发育树 Figure 5　Phylogenetic analysis of Phaeobotryon based on ITS, LSU and tef1-α genes. 最大似然法支持率≥70%及贝叶斯后验概率≥0.9标示在分支节点，模式菌株用粗体和“T”标记，本研究分离的菌株用粗体标记 Maximum likelihood bootstrap support values ≥70% (ML) and Bayesian posterior probabilities ≥0.9 (BYPP) are given at the nodes as ML/MP/BYPP. The type strains are in bold and marked with "T". The new isolates are in bold.

图选项

有性型：未发现。

无性型：腐生于文冠果枯枝上，分生孢子器(160.5–248.0) μm×(122–238) μm ($\bar x$=210 μm×164 µm, n=5)，半埋生，成熟后撑破枝干表皮，散生或聚生，多腔室，深褐色至黑色，球形至近球形，具圆形或卵形孔口。分生孢子器的壁厚17–50 μm，由8–15层棕色至深棕色细胞按照角胞组织的形式排列构成，细胞由内向外颜色逐渐变深。分生孢子梗完全退化为产孢细胞，产孢细胞(10.8–30.5) μm×(1.8–6.2) µm ($\bar x$=20.0 μm×3.3 µm, n=20)，透明，壁光滑且较薄，圆柱形至棒状；分生孢子(15.8–21.5) μm×(4.5–9.0) μm ($\bar x$=18.6 μm×6.5 μm, n=50)，透明，光滑，椭圆形至长椭圆形，亚圆柱形至倒卵形，无隔膜，孢子内有油滴，无附属物，成熟时变成棕黄色。

菌落特征：菌落生长速度较快，在PDA培养基上25 ℃条件下，生长4 d直径达4.8 cm。菌落初期呈白色，边缘整齐，后期菌丝呈灰褐色，菌丝柔软致密，形成白色无菌贴伏菌丝垫，菌落反面同样呈灰褐色。

标本信息：采集时间：2021年8月12日；采集人：许蓉；采集地点：吉林省四平市梨树县国有林总场文冠果科研基地，采自文冠果枯枝；标本号为HMJAU 64807；菌株号为CCMJ 13039 (ITS、LSU的GenBank登录号分别为OQ846794、OQ845870)。

世界分布：中国。

国内分布：北京市^[33]、吉林省。

2.3 楲生暗葡萄腔菌Phaeobotryon negundinis Daranag., Bulgakov & K.D. Hyde, in Mycosphere 7(7): 936 (2016).

形态见图 6，系统学位置见图 5。

图 6　楲生暗葡萄腔菌的形态图(HMJAU 64808) Figure 6　Morphology of Phaeobotryon negundinis (HMJAU 64808). A–C：文冠果枯枝上的分生孢子器. D：分生孢子器的纵切面. E：分生孢子器的壁. F–H：产孢细胞及分生孢子. I–M：分生孢子. N：楲生暗葡萄腔菌在PDA上的培养形态(左侧培养4 d，右侧培养20 d). 标尺：D为200 μm；E为50 μm；F–M为20 μm A–C: Appearance of conidiomata on host substrate. D: Vertical section of conidiomata. E: Section of conidioma wall. F–H: Conidiogenous cells and conidia. I–M: Conidia. N: Culture characteristics on PDA after 4 d (left) and 20 d (right). Scale bars: D, 200 μm; E, 50 μm; F–M, 20 μm.

图选项

有性型：未发现。

无性型：腐生于文冠果枯枝上，分生孢子器(175–343)×(250–400) μm ($\bar x$=367×332 μm, n=5)，半埋生，成熟后撑破枝干表皮，单生，散生，黑色，单腔室，球形至近球形，具孔口。分生孢子器的壁厚22–60 μm，由5–9层浅棕色至深棕色细胞按照角胞组织的形式排列构成，细胞由内向外颜色逐渐变深。分生孢子梗完全退化为产孢细胞，产孢细胞透明至浅棕色，光滑，全壁芽生，亚圆柱形，大小为(10–17) μm×(1.3–3.2) μm ($\bar x$=13.3 μm×2.4 μm, n=20)。分生孢子(19–25) μm×(7.7–10.7) μm ($\bar x$=22.2 μm×8.7 μm, n=50)，透明，卵圆形，顶端宽圆形，基部截形，无隔膜，成熟后变成棕黄色，孢子内有油滴，光滑，无附属物。

菌落特征：菌落生长速度较快，在PDA培养基上25 ℃条件下，生长4 d直径达6.7 cm。菌落初期呈白色，中间菌丝稀疏，边缘整齐、较密；后期菌丝乳白色，致密，棉絮状。

标本信息：采集时间：2022年7月2日；采集人：许蓉；采集地点：吉林省长春市吉林农业大学校园内，采自文冠果枯枝；标本号为HMJAU 64808；菌株号为CCMJ 13040 (ITS、LSU和tef1-α的GenBank登录号分别为OQ846795、OQ845871和OQ980398)。

世界分布：中国、俄罗斯^[47]。

国内分布：吉林省。

2.4 火炬树生暗葡萄腔菌Phaeobotryon rhois C.M. Tian, X.L. Fan & K.D. Hyde, in Phytotaxa 205(2): 95 (2015).

形态见图 7，系统学位置见图 5。

图 7　火炬树生暗葡萄腔菌(HMJAU 64809) Figure 7　Morphology of Phaeobotryon rhois (HMJAU 64809). A–C：文冠果枯枝上的分生孢子器. D：分生孢子器的纵切面. E：分生孢子器的壁. F：产孢细胞及分生孢子. G：分生孢子. H：火炬树生暗葡萄腔菌在PDA上的培养形态(左侧培养4 d，右侧培养20 d). 标尺：D为100 μm；E为50 μm；F–G为20 μm A–C: Appearance of conidiomata on host substrate. D: Vertical section of conidiomata. E: Section of conidioma wall. F: Conidiogenous cells and conidia. G: Conidia. H: Culture characteristics on PDA after 4 d (left) and 20 d (right). Scale bars: D, 100 μm; E, 50 μm; F–G, 20 μm.

图选项

有性型：未发现。

无性型：腐生于文冠果枯枝上，分生孢子器(150–190)×(140–160) μm ($\bar x$=172×150 μm, n=5)，半埋生，成熟后撑破枝干表皮，聚生或散生，深棕色至黑色，单腔室，球形，具孔口。分生孢子器的壁厚23–47 μm，由3–6层浅棕色细胞按照角胞组织的形式排列构成。分生孢子梗完全退化为产孢细胞，产孢细胞透明，光滑，由排列在腔室内壁的细胞形成，大小(9.0–12.6)×(2.2–3.4) μm ($\bar x$=10.8×2.9 μm, n=15)。分生孢子(17–35) μm×(9–15) μm ($\bar x$=22.5×12.0 μm, n=50)，初期透明，无隔膜，葫芦形，椭圆形至长圆形或亚圆柱形，光滑至有小疣突，末端圆形，成熟时变为深棕色，具1个隔膜，在隔膜处稍缢缩，孢子内有油滴。

菌落特征：菌落生长速度较快，在PDA培养基上25 ℃条件下，生长4 d直径达7 cm。菌落初期呈白色，菌丝稀疏，边缘整齐；后期菌丝呈深绿色至黑色，气生菌丝，中间有贴伏的菌丝垫。

标本信息：采集时间：2022年7月2日；采集人：许蓉；采集地点：吉林省长春市吉林农业大学校园内，采自文冠果枯枝；标本号为HMJAU 64809；菌株号为CCMJ 13041 (ITS、LSU和tef1-α的GenBank登录号分别为OQ846796、OQ845872和OQ980399)。

世界分布：中国。

国内分布：宁夏回族自治区^[32]、北京市^[33-34]和吉林省。

3 讨论与结论

中华葡萄座腔菌(B. sinensis)最早由Zhou等^[31]报道，采集自河南省的桃树、桑树和杨树上。2020年，陈娅娅在贵州省的桃树和禾本科植物标本上分离得到中华葡萄座腔菌^[18]。本研究从吉林省文冠果上采集的标本与陈娅娅^[18]、Zhou等^[31]描述的形态相似，根据系统发育树，本研究分离到的3株菌株与B. sinensis聚为一支且具有较高的支持率(图 3)，因此鉴定为中华葡萄座腔菌(B. sinensis)。该种首次在吉林省的文冠果上发现，扩大了中华葡萄座腔菌在中国的分布范围。

无隔孢暗葡萄腔菌(P. aplosporum)是Pan等^[33]于2019年报道的一个新种，引起鹿角漆树(Rhus typhina)溃疡病害，系统发育分析显示，菌株CCMJ 13039与无隔孢暗葡萄腔菌聚集在一个分支，与模式菌株(CFCC 53775)的ITS序列(446/446)和LSU序列完全一致(814/814)。从形态上看，CCMJ 13039与无隔孢暗葡萄腔菌的分生孢子大小相似(17–19) μm×(5.5–7.0) μm vs. (15.8–21.5) μm×(4.5–9.0) μm，且均无隔膜^[46]。因此，将其鉴定为无隔孢暗葡萄腔菌(P. aplosporum)。

Daranagama等在俄罗斯罗斯托夫地区的梣叶槭(Acer negundo)、金钟连翘(Forsythia intermedia)和女贞(Ligustrum vulgare)上首次报道了槭生暗葡萄腔菌(P. negundinis)，虽然该菌与植株枝干、叶片上的病害症状有关，但致病性尚未得到证实^[47]。系统发育分析显示，菌株CCMJ 13040与楲生暗葡萄腔菌以较高的支持率(89/0.99)聚为一支，且形态特征相似。Daranagama等^[47]认为(P. cupressi)与(P. negundinis)二者的主要区别在于(P. negundinis)的分生孢子略小(24.1–25.0) μm×(12.2–12.5) μm vs. (16.0–24.5) μm×(7.9–11.5) μm，本研究分离得到的CCMJ 13040符合这一特征[(19–25) μm×(7.7–10.7) μm]，依据其主要形态特征及系统分析结果鉴定该种为槭生暗葡萄腔菌(P. negundinis)，本研究新增了该种在中国的地理分布。

目前，火炬树生暗葡萄腔菌(P. rhois)主要引起鹿角漆树、穿龙薯蓣、侧柏和鼠李的溃疡病和枯死病，且仅在中国有报道^[32-34]。菌株CCMJ 13041与火炬树生暗葡萄腔菌的形态相似，分生孢子初期透明，成熟后变为深棕色，具1个隔膜。系统发育分析结果显示，菌株CCMJ 13041以较高的支持率(ML/BI=70/1.00)与模式菌株(P. rhois) CFCC 89662聚为“姊妹”支。因而，将其鉴定为火炬树生暗葡萄腔菌(P. rhois)。

除了中华葡萄座腔菌(B. sinensis)和槭生暗葡萄腔菌(P. negundinis)外，另外两种真菌均可引起树木溃疡病或枯死病，这与前人报道的葡萄座腔菌科大多为农业和林业上重要的病原菌且主要为树木溃疡病病原菌的报道一致^[6-12]。本文从文冠果枝干上分离到这4种真菌，对其分类学进行深入研究，丰富了文冠果上微型子囊菌物种多样性及种质资源，扩大了葡萄座腔菌科物种的地理分布。后续研究还需要通过致病性测定验证4种真菌是否具有致病力，明确真菌的生物学特征，为文冠果溃疡病的发生及防治提供理论依据。

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