微生物学通报  2019, Vol. 46 Issue (2): 243−251

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袁雪梅, 王敏, 张强, 白华, 周帆, 刘鹏飞, 张康, 邢继红, 董金皋
YUAN Xue-Mei, WANG Min, ZHANG Qiang, BAI Hua, ZHOU Fan, LIU Peng-Fei, ZHANG Kang, XING Ji-Hong, DONG Jin-Gao
灰葡萄孢丝裂原活化蛋白激酶编码基因bmp1bmp3的功能
Function of mitogen-activated protein kinase encoding genes bmp1 and bmp3 in Botrytis cinerea
微生物学通报, 2019, 46(2): 243-251
Microbiology China, 2019, 46(2): 243-251
DOI: 10.13344/j.microbiol.china.180503

文章历史

收稿日期: 2018-06-28
接受日期: 2018-08-30
网络首发日期: 2018-09-11
灰葡萄孢丝裂原活化蛋白激酶编码基因bmp1bmp3的功能
袁雪梅 Δ, 王敏 Δ, 张强 , 白华 , 周帆 , 刘鹏飞 , 张康 , 邢继红 , 董金皋     
河北省植物生理与分子病理学重点实验室 河北农业大学真菌毒素与植物分子病理学实验室    河北 保定    071000
摘要【背景】 植物病原真菌丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号途径参与病菌有性生殖、细胞壁完整、菌丝侵染、致病力、胁迫响应等过程,灰葡萄孢MAPK信号途径参与病菌生长发育、致病力以及胁迫响应,但MAPK信号途径基因在灰葡萄孢中的功能尚未完全阐明,该信号途径对灰葡萄孢的生长发育和致病力的调控机制尚不明确。【目的】 明确灰葡萄孢MAPK编码基因bmp1bmp3在病菌生长发育、致病力以及氧化胁迫响应过程的功能,为进一步阐明MAPK信号途径调控灰葡萄孢生长发育和致病力的分子机制奠定基础。【方法】 利用RNAi技术构建灰葡萄孢MAPK编码基因bmp1bmp3的RNAi突变体,并以野生型BC22菌株为对照,对bmp1bmp3基因的RNAi突变体的表型、致病力以及对氧化胁迫的敏感性进行分析。【结果】 灰葡萄孢bmp1bmp3基因的RNAi突变体其菌落形态、菌丝形态均与野生型BC22菌株没有明显差别;bmp1基因的RNAi突变体生长速率明显减慢,分生孢子产量明显降低;bmp3基因的RNAi突变体的生长速率与野生型BC22菌株没有明显差别,不能产生分生孢子。bmp1bmp3基因的RNAi突变体在番茄果实的表面均不能产生明显的致病症状,而且不能穿透玻璃纸。bmp1基因的RNAi突变体在含有H2O2的培养基上受抑制的程度显著低于野生型,而在含甲萘醌的培养基上受抑制的程度显著高于野生型;bmp3基因的RNAi突变体在含有H2O2和甲萘醌的培养基受抑制的程度均显著高于野生型。【结论】 灰葡萄孢bmp1基因正调控病菌生长、分生孢子形成、致病力和穿透能力,参与调控病菌对氧化胁迫的响应;灰葡萄孢bmp3基因正调控病菌分生孢子形成、致病力、穿透能力以及对氧化胁迫的响应。
关键词灰葡萄孢    bmp1    bmp3    生长发育    致病力    氧化胁迫    
Function of mitogen-activated protein kinase encoding genes bmp1 and bmp3 in Botrytis cinerea
YUAN Xue-Mei Δ, WANG Min Δ, ZHANG Qiang , BAI Hua , ZHOU Fan , LIU Peng-Fei , ZHANG Kang , XING Ji-Hong , DONG Jin-Gao     
Key Laboratory of Hebei Province for Plant Physiology and Molecular Pathology, Mycotoxin and Molecular Plant Pathology Laboratory, Hebei Agricultural University, Baoding, Hebei 071000, China
Abstract: [Background] Mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathway of plant pathogenic fungi is involved in sexual reproduction, cell wall integrity, mycelial infection, pathogenicity, stress response and other processes. The MAPK signaling pathway is involved in the growth, development, pathogenicity and stress response in Botrytis cinerea. However, the function of MAPK signaling pathway gene has not been fully elucidated in B. cinerea. [Objective] The objective of this study is to analyze the function of B. cinerea MAPK encoding genes bmp1 and bmp3 in growth, development, pathogenicity and response to oxidative stress, and to lay a foundation for clarifying the molecular mechanism of the MAPK signaling pathway in growth, development and pathogenicity in B. cinerea. [Methods] RNAi mutants of bmp1 and bmp3 genes were successfully constructed using RNAi technology. Compared with the wild-type strain BC22 (WT), phenotype, pathogenicity, and sensitivity to oxidative stress of bmp1 and bmp3 genes RNAi mutants were analyzed. [Results] The colony morphology and mycelia morphology of bmp1 and bmp3 gene RNAi mutants showed no obvious difference with WT. The bmp1 gene RNAi mutants grew slowly and produce fewer conidial. The growth rate of bmp3 gene RNAi mutants showed no obvious difference with WT. The bmp3 gene RNAi mutants did not produce conidia. RNAi mutants of bmp1 and bmp3 genes showed no pathogenicity and penetrating ability. RNAi mutants of bmp1 gene were significantly less inhibited than those of WT in the media containing H2O2, while the degree of inhibition was significantly higher in the media containing menadione than that of WT. RNAi mutants of bmp3 gene were significantly inhibited in H2O2 and menadione media than that of WT. [Conclusion] The bmp1 gene positively regulated growth, conidial formation, pathogenicity and penetrability, and was involved in the regulation of the response to oxidative stress in B. cinerea. The bmp3 gene positively regulates conidial formation, pathogenicity, penetrability, and response to oxidative stress in B. cinerea.
Keywords: Botrytis cinerea    bmp1    bmp3    Growth and development    Pathogenicity    Oxidative stress    

丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号途径在植物病原真菌有性生殖、细胞壁完整性、菌丝侵染、附着胞形成、致病力和胁迫响应等方面起到非常重要的调控作用[1]。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)有5条MAPK信号途径,分别调控有性生殖、菌丝侵入性生长、细胞壁完整性、高渗胁迫响应和子囊孢子的形成[2]。玉米瘤黑粉(Ustilago maydis)的MAPK信号途径参与调控有性生殖和寄生生长过程[3]。稻瘟菌(Magnaporche moryzae)的MAPK信号途径调控附着胞形成的后期阶段及侵入阶段[4]。灰葡萄孢(Botrytis cinerea) MAPK信号途径参与调控病菌生长发育、致病力以及响应胁迫过程,其主要包括3种类型的MAPK编码基因bmp1[5-6]bmp3[7]bcsak1[8-9]bmp1基因的缺失突变体Δbmp1生长速率减慢,分生孢子的产量降低,不能穿透寄主组织,分生孢子可以在寄主植物的表面萌发,但即使在受伤的植物上也不能在宿主组织中定殖,在康乃馨的花朵和西红柿叶片上均不致病[5-6]bmp3基因的缺失突变体Δbmp3的生长速率减慢,分生孢子形成受阻,不能产生菌核,对低渗胁迫、氧化胁迫和苯吡咯的敏感性增强[7]bcsak1基因的缺失突变体Δbcsak1的生长速度下降,不能产生分生孢子,菌核产生量增加,不能穿透未受伤的植物组织,致病力明显降低,对低渗胁迫和氧化胁迫敏感性增强[8-9]bmp3bcsak1下游的bcreg1基因与致病力也密切相关,Δbcreg1突变体不产生分生孢子,能够穿透植物组织但不能形成致病斑[10]。TCHK-MAPK信号途径中BOS4BOS5BOS2与致病性密切相关,其敲除突变体致病力均完全丧失,BOS5敲除突变体菌丝的生长速率远远低于野生型菌株,虽能够穿透寄主细胞,但是菌丝的形态发生严重畸形[11]。此外,编码MAPK激酶(MAPKK) Ste7、MAPKK激酶(MAPKKK) Ste11、假定MAPK衔接蛋白Ste50的基因和Bmp1下游的Ste12转录因子也影响病菌的致病力、分生孢子的萌发、营养生长和菌核的形成等方面[7, 12]。以上结果均说明灰葡萄孢MAPK信号途径在病菌的生长发育、致病力以及响应胁迫过程中发挥重要的功能。但MAPK信号途径基因在灰葡萄孢中的功能尚未完全阐明,该信号途径对灰葡萄孢的生长发育和致病力的调控机制尚不明确。

为明确灰葡萄孢MAP激酶编码基因bmp1bmp3在病菌生长发育、致病和响应胁迫过程中的功能,本研究利用RNAi技术构建bmp1bmp3基因的RNAi突变体,通过将RNAi突变体的表型、致病力和对胁迫处理的敏感性与野生型BC22菌株进行比较,确定bmp1bmp3基因的功能,为阐明MAPK信号途径对灰葡萄孢生长发育和致病力的调控机制奠定基础,同时为其它植物病原真菌中MAPK信号途径的研究提供参考。

1 材料与方法 1.1 试验材料

1.1.1 菌株和载体

灰葡萄孢野生型BC22菌株、RNAi载体pK7GW1WG2、根癌农杆菌AGL-1菌株,均由河北农业大学真菌毒素与植物分子病理学实验室保存。

1.1.2 主要试剂和仪器

pCRTM8/GW/TOPO® TA Cloning Kit、Gateway® LR ClonaseTM ⅡEnzyme Mix,Invitrogen公司;高保真聚合酶LA-Taq、dNTPs、大肠杆菌DH5α感受态细胞、PrimeScriptTM RT Reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time),TaKaRa公司;RNA提取试剂Trizol up、壮观霉素、卡那霉素,北京全式金生物技术有限公司;头孢噻肟、草铵膦,Roche生物公司。SPX智能型生化培养箱,宁波江南仪器厂;基因扩增仪,东胜创新生物科技有限公司。

1.2 bmp1bmp3基因RNAi载体的构建

根据bmp1bmp3基因的cDNA序列设计基因特异性引物(表 1)。提取灰葡萄孢野生型菌株的RNA,反转录合成cDNA,用高保真的LA-Taqbmp1bmp3基因的特异片段进行PCR扩增。PCR反应体系(50 μL):模板cDNA 2 μL,10×PCR buffer (含Mg2+) 5 μL,dNTPs (2.5 mmol/L) 8 μL,上、下游引物(10 μmol/L)各1 μL,LA-Taq (5 U/μL) 1 μL,ddH2O 32 μL。PCR反应条件:95 ℃ 5 min;94 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,共32个循环;72 ℃ 10 min。PCR扩增产物经1%的琼脂糖凝胶电泳检测后,进行目的条带的回收、克隆。将目的基因片段与Gateway克隆载体pCR8进行连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,利用载体特异性引物M13进行阳性克隆的PCR检测,PCR检测为阳性的克隆进行测序验证,将测序鉴定正确的质粒pCR8-bmp1和pCR8-bmp3分别与RNAi载体pK7GW1WG2进行LR重组反应,反应产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,阳性克隆进行PCR检测和测序验证后进行重组质粒pK7GW1WG2-bmp1和pK7GW1WG2-bmp3的提取。

表 1 实验所用引物信息 Table 1 Primers used in this study
基因名称
Genes name
引物名称
Primers name
引物序列
Primers sequence (5′→3′)
产物大小
Product size (bp)
bmp1 bmp1-F AGCTCGTGCGCCTAATCCCGCCTCG 279
bmp1-R ACTCATAGTTTCTTGGCTTCTGGATGT
bmp3 bmp3-F ATGGCAGACCTGCAAGGAAGAAAGGTC 272
bmp3-R ATATCCATATCATAAAGGCAGGTAA
Kan Kan-F TGTAAAACGACGGCCAG 620
Kan-R TTACGCCCCGCCCTGCCACTCAT
Tubulin Tubulin-F TCTGGCGAGCACGGTCTTGACGGTT 141
Tubulin-R CTGGCTCCAAATCGACGAGGACGGCA
M13 M13-F TGTAAAACGACGGCCAG 316
M13-R CCAGGAAACAGCTATGACC
1.3 农杆菌介导的遗传转化

将重组质粒pK7GW1WG2-bmp1、pK7GW1WG2-bmp3分别转化农杆菌AGL-1的感受态细胞后,与灰葡萄孢野生型BC22菌株的分生孢子悬浮液(1×106个/mL)混合,涂布于IAM培养基上的硝酸纤维素膜上,20 ℃培养48 h,将硝酸纤维素膜转移至含有200 μg/mL头孢噻肟和100 μg/mL草铵膦的LCA培养基上,20 ℃培养7-12 d,直至长出转化子。

1.4 转化子的筛选与鉴定

利用LCA筛选培养基对转化子进行多次抗性筛选。利用PCR和Real-time PCR技术对所获得的转化子进行分子鉴定。以各转化子的DNA为模板,利用RNAi载体的kan基因特异引物进行PCR检测。同时,以各转化子的cDNA为模板,利用bmp1bmp3基因的特异引物进行Real-time PCR检测,以确定转化子中bmp1bmp3基因的表达水平是否受到干扰。

1.5 RNAi突变体的表型分析

将灰葡萄孢野生型BC22菌株和bmp1bmp3基因的RNAi突变体分别接种到PDA培养基上,20 ℃黑暗条件下培养,每隔24 h测量一次菌落直径,计算各菌株的生长速率。同时进行菌落形态和菌丝形态的观察。

在培养15 d的各菌株培养皿中分别加入10 mL无菌去离子水,并以毛笔轻刷菌落表面,获得各菌株的菌体悬浮液,4层纱布过滤去除菌丝体,获得其分生孢子悬浮液,用血球计数板统计各菌株的分生孢子产量。

1.6 RNAi突变体的致病力测定

将灰葡萄孢野生型BC22菌株和bmp1bmp3基因的RNAi突变体的菌盘(Φ=8 mm)分别接种到番茄果实的表面,进行致病力测定。接种后的番茄果实置于20 ℃保湿处理,每天观察番茄接种部位的发病情况,重复3次。

1.7 RNAi突变体的穿透能力测定

将灰葡萄孢野生型BC22菌株和bmp1bmp3基因的RNAi突变体菌株分别定量接种到铺有玻璃纸的水琼脂培养上,在20 ℃条件下黑暗培养,显微镜下观察各菌株穿透玻璃纸的情况。

1.8 RNAi突变体对氧化胁迫的敏感性测定

将灰葡萄孢野生型BC22菌株和bmp1bmp3基因的RNAi突变体菌株分别接种于含10 mmol/L H2O2和250 μmol/L甲萘醌的PDA培养基上,观察各菌株对氧化胁迫的敏感性情况,并进行抑制率计算。

2 结果与分析 2.1 bmp1bmp3基因RNAi载体的构建及农杆菌的遗传转化

利用Gateway技术成功获得bmp1bmp3基因的RNAi载体pK7GW1WG2-bmp1和pK7GW1WG2-bmp3 (图 1A)。将bmp1bmp3基因的RNAi载体分别转化农杆菌AGL-1,菌落PCR检测均获得了目的条带(图 1BC),表明bmp1bmp3基因的RNAi载体成功转入农杆菌AGL-1中。

图 1 bmp1bmp3基因RNAi载体的构建及农杆菌转化的PCR鉴定 Figure 1 Construction and Agrobacterium transformation of bmp1 and bmp3 genes RNAi vectors 注:A:bmp1bmp3基因的RNAi载体图谱;B:pK7GW1WG2-bmp1转化农杆菌的PCR鉴定;C:pK7GW1WG2-bmp3转化农杆菌的PCR鉴定. M:DNA marker. Note: A: RNAi vector of bmp1 and bmp3 gene; B: PCR identification of Agrobacterium transformed pK7GW1WG2-bmp1; C: PCR identification of Agrobacterium transformed pK7GW1WG2-bmp3. M: DNA marker.
2.2 RNAi转化子的筛选与鉴定

利用农杆菌介导的遗传转化方法,将bmp1bmp3基因的RNAi载体pK7GW1WG2-bmp1和pK7GW1WG2-bmp3分别转化灰葡萄孢野生型BC22菌株,经过多次的抗性筛选后分别获得了bmp1bmp3基因的3株RNAi转化子ibmp1-1、ibmp1-2和ibmp1-3以及ibmp3-1、ibmp3-2和ibmp3-3。PCR鉴定转化子发现各转化子中均获得了单一的目的条带,而野生型BC22菌株中无扩增产物(图 2AB)。进一步利用Real-time PCR技术检测RNAi转化子中bmp1bmp3基因的表达水平,发现转化子中bmp1bmp3基因的表达水平均显著低于野生型,转化子ibmp1-1、ibmp1-2和ibmp1-3中bmp1基因的表达水平分别为野生型的0.47、0.49和0.29倍(图 2C),转化子ibmp3-1、ibmp3-2和ibmp3-3中bmp3基因的表达水平分别为野生型的0.01、0.68和0.49倍(图 2D),表明bmp1bmp3基因的RNAi突变体构建成功。

图 2 bmp1bmp3基因RNAi转化子的鉴定 Figure 2 Identification of bmp1 and bmp3 genes RNAi transformants 注:A:bmp1基因RNAi转化子的PCR鉴定;M:Marker;WT:野生型BC22;1:转化子ibmp1-1;2:转化子ibmp1-2;3:转化子ibmp1-3. B:bmp3基因RNAi转化子的PCR鉴定;M:Marker;WT:野生型BC22;1:转化子ibmp3-1;2:转化子ibmp3-2;3:转化子ibmp3-3. C:bmp1基因RNAi转化子中bmp1基因的表达分析. D:bmp3基因RNAi转化子中bmp3基因的表达分析. Note: A: PCR identification of bmp1 gene RNAi transformants; M: Marker; WT: Wild type BC22; 1: Transformant ibmp1-1; 2: Transformant ibmp1-2; 3: Transformant ibmp1-3. B: PCR identification of bmp3 gene RNAi transformants; M: Marker; WT: Wild-type BC22; 1: Transformant ibmp3-1; 2: Transformant ibmp3-2; 3: Transformant ibmp3-3. C: Expression analysis of bmp1 gene in RNAi transformants. D: Expression analysis of bmp3 gene in RNAi transformants.
2.3 RNAi突变体的表型分析

bmp1bmp3基因RNAi突变体的菌落形态、菌丝形态、生长速率、分生孢子产量进行分析的结果发现,与野生型BC22菌株相比,培养3 d的bmp1基因RNAi突变体的菌落和菌丝形态没有明显变化(图 3A),菌丝的生长速率明显减慢(图 3B),分生孢子产量显著降低(图 3C);bmp3基因RNAi突变体的菌落和菌丝形态也没有明显变化(图 3D),生长速率与野生型没有明显差别(图 3E),不产生分生孢子(图 3F)。结果表明,bmp1基因正调控病菌的生长、分生孢子的形成;bmp3基因正调控病菌分生孢子的形成,对病菌的生长没有影响。

图 3 bmp1bmp3基因RNAi突变体的表型分析 Figure 3 Phenotype analysis of bmp1 and bmp3 genes RNAi mutants 注:A:bmp1基因RNAi突变体的菌落和菌丝形态;B:bmp1基因RNAi突变体的生长速率;C:bmp1基因RNAi突变体的产孢量;D:bmp3基因RNAi突变体的菌落和菌丝形态;E:bmp3基因RNAi突变体的生长速率;F:bmp3基因RNAi突变体的产孢量. Note: A: Colony and mycelial morphology of bmp1 gene RNAi mutants; B: Growth rate of bmp1 gene RNAi mutants; C: Conidiation of bmp1 gene RNAi mutants; D: Colony and mycelial morphology of bmp3 gene RNAi mutants; E: Growth rate of bmp3 gene RNAi mutants; F: Conidiation of bmp3 gene RNAi mutants.
2.4 RNAi突变体的致病力测定

将野生型BC22和bmp1bmp3基因的RNAi突变体分别接种到番茄果实的表面进行了致病力测定,结果发现,接种3 d后,野生型BC22的番茄果实表面出现了大面积的水渍状病斑,而接种bmp1bmp3基因RNAi突变体的番茄果实表面均未出现明显的病斑(图 4),表明bmp1bmp3基因正调控灰葡萄孢的致病力。

图 4 bmp1 (A)和bmp3 (B)基因RNAi突变体的致病力测定 Figure 4 Pathogenicity analysis of bmp1 (A) and bmp3 (B) genes RNAi mutants
2.5 RNAi突变体的穿透能力测定

利用玻璃纸检测野生型BC22和bmp1bmp3基因RNAi突变体的穿透能力,结果(图 5)发现,野生型BC22菌株能穿透玻璃纸,产生侵入菌丝,而bmp1bmp3基因RNAi突变体均不能穿透玻璃纸,表明bmp1bmp3基因突变影响病菌的穿透能力。

图 5 bmp1 (A)和bmp3 (B)基因RNAi突变体的穿透能力测定 Figure 5 Penetrability analysis of bmp1 (A) and bmp3 (B) genes RNAi mutants
2.6 RNAi突变体对氧化胁迫的敏感性测定

将野生型BC22和bmp1bmp3基因的RNAi突变体分别接种到含有H2O2和甲萘醌的PDA培养基上,检测bmp1bmp3基因RNAi突变体对氧化胁迫的敏感性。结果(图 6)发现,接种3 d后,野生型BC22和bmp1bmp3基因RNAi突变体在含有H2O2和甲萘醌的PDA培养基上均受到明显抑制,bmp1基因的RNAi突变体在含有H2O2的PDA培养基上受抑制的程度显著低于野生型,而在含甲萘醌的PDA培养基上受抑制的程度显著高于野生型;bmp3基因的RNAi突变体在含有H2O2和甲萘醌的PDA培养基上受抑制的程度均显著高于野生型,表明bmp1bmp3基因突变影响病菌对氧化胁迫的响应。

图 6 bmp1bmp3基因RNAi突变体对H2O2和甲萘醌的敏感性测定 Figure 6 Sensitivity of bmp1 and bmp3 genes RNAi mutants to H2O2 and menadione 注:A、C:RNAi突变体过氧化氢和甲萘醌的敏感性测定;B、D:抑制率测定 Note: A, C: Sensitivity of RNAi mutants to H2O2 and menadione; B, D: Determination of inhibition rate.
3 讨论与结论

灰葡萄孢MAPK信号途径参与病菌的生长、发育和致病过程[13-15],MAP激酶编码基因bmp1参与调控菌丝生长、分生孢子形成、附着胞形成与穿透[6, 13],MAP激酶编码基因bmp3参与调控菌丝生长、分生孢子和菌核形成[7, 14-15]。本研究中,bmp1基因的RNAi突变体的表型和致病力与Δbmp1突变体(野生型菌株为B05.10)基本一致,bmp1基因的RNAi突变体生长速率明显减慢,分生孢子产量明显降低,在番茄果实的表面均不能产生明显的致病症状,此结果与Δbmp1突变体一致,表明bmp1基因正调控灰葡萄孢生长、分生孢子形成和致病力。bmp3基因的RNAi突变体的生长速率与野生型BC22菌株没有明显差别,不能产生分生孢子,在番茄果实的表面均不能产生明显的致病症状,这与Δbmp3突变体(野生型菌株为B05.10)的表型和致病力不完全相同;Δbmp3突变体生长速率减慢,分生孢子数量显著降低,不能产生菌核,致病力减弱[7],表明bmp3基因缺失突变体和表达水平降低引起的表型具有一定的差异。

灰葡萄孢MAP激酶编码基因bmp3参与病菌对渗透胁迫和氧化应激的响应[7]。Δbmp3突变体在渗透胁迫培养基上的生长速率明显降低[7]。H2O2作为一种强氧化剂,是生物体内最丰富的活性氧分子;甲萘醌能在有氧代谢细胞内产生O2-或者通过消耗NADPH减少分子氧产生超氧化物歧化酶,而胞内的超氧化物歧化酶是O2-的专一清除剂,可以将O2-转变为内源的H2O2[16]。此外,研究已经证明甲萘醌可诱导真菌产生氧化应激反应[9, 16-20]。本研究发现bmp1基因的RNAi突变体对H2O2的敏感性显著降低,对甲萘醌的敏感性显著增强;bmp3基因的RNAi突变体对H2O2和甲萘醌的敏感性均显著增强,结果表明灰葡萄孢bmp1bmp3基因参与病菌对氧化胁迫的响应,但bmp1bmp3基因调控病菌对氧化胁迫响应的机制尚未明确,需进一步深入研究。

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