赤灵芝(Ganoderma lucidum)隶属担子菌门多孔菌目灵芝科灵芝属，在古代中国称瑞草，是一种珍贵食药两用菌。灵芝多糖是灵芝中最主要的成分之一^[1]，具有提高人体免疫力、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗氧化、安神、消除放化疗副反应、除胃热、保肝解毒等功效^[2-3]。随着人们保健养生意识的不断增强，对灵芝的品质需求也随之增大。

不同栽培方式和栽培基质对灵芝的品质有着很大的影响。椴木栽培、代料栽培的灵芝在外观、产量等农艺性状指标上差异显著^[4]，曹立珍等证明不同栽培方式培养的灵芝子实体多糖含量及其诱导淋巴细胞增殖的活性并无显著性差异^[5]。不同树种作为基质栽培的灵芝子实体外表色泽的深浅及光泽度有明显差异，其生物转化有较大差别^[6]。目前大部分研究证明树皮较厚、形成层发达、不易与木质部剥离、树质坚硬的树种比较适宜于灵芝的栽培，且大多属于壳斗科植物^[7]。然而，目前生态环境破坏严重，椴木原料受到一定的制约。因此，人们不断开发新型的、来源广、成本低的灵芝栽培原料，同时希望能够有效利用一些废弃资源^[8]。已有的一些研究报道显示，利用枝桠材栽培灵芝使产量得到提升^[9]；利用桑枝屑和桑枝条栽培灵芝获得高产，同时多糖含量比杂木和椴木灵芝高30%以上^[10-11]；郭耀辉等利用中药材非药用部位栽培灵芝，灵芝的活性成分及药效发生变化，菊花栽培的灵芝具有较好的调节免疫及改善睡眠的效果^[12]。

我国果树资源丰富，每年修剪果树产生大量的枝干、枝条，通常被当作垃圾处理或者用来烧火做饭，资源没有得到合理有效利用，同时还污染环境。近年来，果树枝条作为食用菌栽培基质，不仅解决果树枝条资源浪费，同时解决食用菌栽培原料不足问题。有研究表明，利用苹果枝条、桃树枝条成功栽培香菇、鲍鱼菇，并获得了较高的产量^[13-15]。我们利用四川特色的果树枝条作为灵芝的栽培原料，通过考察菌丝体的生长、子实体的外观以及产量等农艺性状指标，结合其营养成分、活性成分以及其药理作用，研究果树枝条对栽培灵芝品质的影响，探讨果树枝条作为灵芝栽培基质的可行性。

1.1.1 供试菌株：赤灵芝(Ganoderma lucidum，菌株名：金地灵芝)，由四川省农业科学院土壤肥料研究所提供。菌种在PDA培养基(g/L，土豆200，葡萄糖20，琼脂粉20)上转接活化，于28 ℃培养，备用。

1.1.2 栽培原料：苹果树枝条、桃树枝条、梨树枝条均来源于四川龙泉。

灵芝栽培方法采用代料栽培，选用22 cm× 42 cm×0.025 cm的聚丙烯袋，每袋栽培干料1 kg，每种栽培基质配方100袋，3个重复。表 1显示试验分组及其栽培基质配方。

灵芝菌丝接种后，分别测定菌丝的生长速度、满袋天数以及菌袋的污染率，成熟后采摘，55 ℃烘干至恒重，称重测定其产量。产量以均袋干重计，为总重量/总袋数。

将采集的灵芝送至四川省农业科学院分析测试中心进行营养成分的测定。

灵芝粉碎后，称取10 g粉末，按1:20的料水比添加蒸馏水，100 ℃热水浸提1 h，浸提2次，合并上清液，旋转蒸发浓缩，真空冷冻干燥获得灵芝水提物。参考文献^[16]方法，采用苯酚-硫酸法测定灵芝多糖的含量。

1.6.1 直接睡眠实验：SPF级6周龄18-22 g的BALB/C小鼠50只，随机分成5组，每组10只。分为对照组、常规配方组、苹果枝条配方组、桃树枝条配方组、梨树枝条配方组。实验组每天给予75 mg/(kg·bw)的灵芝提取物，对照组给予相同体积的生理盐水，连续灌胃30 d。末次给药30 min后，观察各组小鼠的睡眠发生率。睡眠以翻正反射消失为判断指标，当小鼠置于背卧位时，60 s内不能翻正，即认为翻正反射消失，进入睡眠。记录空白对照组与受试样品组入睡动物数及睡眠时间。

1.6.2 延长戊巴比妥钠睡眠时间实验：分组和给药同1.6.1。末次给药30 min后，各组小鼠腹腔注射60 mg/(kg·bw)戊巴比妥钠，以翻正反射消失为指标，观察睡眠时间。

1.6.3 戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验：分组和给药同1.6.1。末次给药30 min后，各组小鼠腹腔注射30 mg/kg·bw戊巴比妥钠最大阈下催眠剂量，记录小鼠入睡潜伏期的时间，同时30 min内入睡小鼠只数。

数据以平均值±标准差表示，采用方差分析One-way ANOVA和非参数检验Chi square进行统计分析。

不同栽培配方栽培灵芝的农艺性状见表 2，3种果树枝条组的灵芝菌丝体生长速度显著低于常规组(P＜0.05)，发菌时间延长7-13 d，同时菌袋的污染率较对照组有所上升，其外观性状也逊色于常规配方组(P＜0.05)，并且产量均有不同程度的下降。总体来说，常规配方组栽培的灵芝农艺性状较果树枝条栽培的更优(图 1)。

图 1　不同栽培基质配方灵芝子实体外观性状 Figure 1　The appearance of fruit body of G. lucidum cultivated on the different substrate formula A：常规配方组；B：苹果枝条组；C：桃树枝条组；D：梨树枝条组. A: Control; B: Apple Group; C: Peach Group; D: Pear Group.

图选项

各组之间的蛋白质含量、粗脂肪含量、氨基酸总量均无明显差异，而果树枝条组的矿质元素含量均远远大于常规组(表 3)，梨树枝条组钙、镁、铁、锌的含量较常规组有极显著差异(P＜0.01)，桃树枝条组的钙、镁、锌的含量较对照组有极显著差异(P＜0.01)，苹果枝条组的钙、铁、锌的含量较对照组有显著差异(P＜0.05)。

多糖是灵芝的最重要的活性成分之一，3种果树枝条组的灵芝多糖含量均比常规组低，苹果枝条配方和桃树枝条配方栽培的灵芝(图 2)，其多糖含量与常规配方组差异不显著(P≥0.05)，而梨树枝条栽培的灵芝，其多糖含量显著低于常规组(P＜0.05)。

图 2　不同配方栽培的灵芝多糖含量的变化 Figure 2　The content of polysaccharide of G. lucidum in each group *：与常规组相比较差异显著(P ＜0.05). *: There was significant different with control group (P ＜0.05).

图选项

3种果树枝条组与常规组在给予灵芝水提取物60 min内，均未发现小鼠进入睡眠，说明灵芝提取物无直接睡眠现象。灵芝提取物对小鼠睡眠的作用见表 4，3种果树枝条组与常规组较空白对照组均能够有效延长戊巴比妥钠的睡眠时间(P＜0.05)，各组间无明显差异(P≥0.05)；梨树枝条组能够缩短睡眠潜伏期，增加小鼠的入睡率(60%)，与空白对照组比差异显著(P＜0.05)。

不同的栽培基质对灵芝的品质有着很大的影响，大多数认为质地坚硬、树皮较厚、不易与木质部剥离的壳斗科树种适宜灵芝栽培^[17]，且壳斗科不同树种栽培的灵芝子实体外观有明显差异，其生物转化速度亦有较大差别^[6]。3种果树枝条栽培的灵芝菌丝体生长速度慢，污染率较高，并且产量均低于常规组，含水量的变化可能是原因之一。果树枝条粉碎后木屑较粗，导致其保水性能不佳，而常规组的杂木屑大多来源于壳斗科，粒径较细，保水性更优。从营养成分来看，果树枝条栽培的灵芝子实体的蛋白、氨基酸、脂肪等含量与常规组无差别，栽培基质为灵芝的生长提供了充足的碳源和氮源；果树枝条栽培的灵芝子实体的矿质元素的含量较常规组显著上升，这可能是因为果树枝条本身的矿质元素含量较常规组高，灵芝的吸附作用导致了栽培基质中矿质元素的转移，这与Jo等^[8]的研究结果一致，栽培基质的改变是导致灵芝中矿质元素升高的直接原因。

果树枝条对栽培灵芝的活性成分及改善睡眠的功能有一定的影响，果树枝条栽培的灵芝多糖含量较低，梨树枝条组较常规组有显著差异。目前有关高等真菌多糖合成的代谢途径研究基本空白，但已有的研究表明，不同微生物细胞体系中多糖合成代谢的基本途径十分相似^[18]，其共同的特点是都由常见的单糖重复单元组成^[19-20]。果树枝条中含有丰富的多酚类物质，对糖代谢有一定的抑制作用。研究表明苹果多酚提取物对体外蛋白质非酶糖化有抑制作用，并且可有效抑制α-淀粉酶和β-葡萄糖苷酶活性^[21-23]。虽然如此，果树栽培的灵芝在一定程度上具有改善睡眠的效果，梨树组栽培的灵芝改善睡眠的作用最佳。多糖可能不是灵芝改善睡眠功能唯一的活性成分，有研究发现，微量元素锌对睡眠剥夺模型大鼠的学习记忆能力有明显的保护作用^[24]。Cherasse等发现含锌的酵母提取物具有促进非快速眼运动睡眠的作用^[25]。本研究发现，梨树栽培的灵芝中锌离子的含量较其他组高出约2-3倍，这可能是梨树枝条组改善睡眠作用的主要原因，同时也有可能与灵芝中其他成分相关，值得进一步深入研究。

利用果树枝条栽培灵芝对其产量及生产周期有一定影响，但是可提高其矿质元素含量及改善睡眠的效果。因此，果树枝条栽培灵芝是可行的，可以通过筛选最佳的栽培基质，实现灵芝的优质高产与果树枝条的有效循环利用。