豇豆胰蛋白酶抑制剂cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达
  
DOI:  
中文关键词:中国科学院遗传研究所,北京100101
英文关键词:
基金项目:
刘春明  朱祯  周兆斓  孙宝林  李向辉
中国科学院遗传研究所,北京100101
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中文摘要:
      从即将成熟的豇豆予叶中分离出总RNA,逆转录合成cDNA第一条链。参照已知的几种Bowman—Birk型胰蛋白酶抑制剂基因序列,设计并合成了两段寡核苷酸引物,以单链cDNA为模板,进行PCR扩增,得到320bp的均一扩增产物,克隆到pBluescrip sK(+)的EcoRV位点上并转化大肠杆菌JM101。酶切图谱及DNA序列分析表明克隆到的片段含有编码完整80个aa的豇豆胰蛋白酶抑制剂结构基因和一段编码27aa的前导序列。利用限制酶NcoI对其前导序列进行缺失,只保留成熟蛋白结构基因上游第一个ATG密码子并克隆到大肠杆菌表达载体pKK233—2中进行表达研究,从转化细菌的提取物中检测到了外源CpTJ基因表达产物对胰蛋白酶的抑制活力。
英文摘要:
      
刘春明,朱祯,周兆斓,孙宝林,李向辉.豇豆胰蛋白酶抑制剂cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达[J].生物工程学报,1993,9(2):
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