来源于葡萄球菌的N-乙酰神经氨酸裂合酶的基因克隆及性质
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国家重点基础研究发展计划 (973计划) (No. 2011CB710801) 资助。


Molecular cloning and characterization of a N-acetylneuraminate lyase gene from Staphylococcus hominis
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National Basic Research Program of China (973 Program) (No. 2011CB710801).

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    摘要:

    葡萄球菌Staphylococcus hominis来源的N-乙酰神经氨酸裂合酶基因shnal (GenBank Accession No. EFS20452.1) 构建至pET-28a质粒并在大肠杆菌中得到表达。通过目的蛋白的纯化和酶学性质研究发现,ShNAL是一个四聚体,裂解方向的最适反应pH为8.0;合成方向的最适反应pH为7.5,最适反应温度为45 ℃。在45 ℃下孵育2 h对ShNAL的活力基本无影响,高于45 ℃时,活力迅速下降。该酶在pH 5.0~10.0的环境中比较稳定,4 ℃下放置24 h酶的残余活力在70%以上。ShNAL对N-乙酰神经氨酸 (Neu5Ac)、N-乙酰甘露糖胺 (Man) 和丙酮酸 (Pyr) 的Km值分别是 (4.0±0.2) mmol/L、(131.7±12.1) mmol/L和 (35.1±3.2) mmol/L,kcat/Km值分别为1.9 L/(mmol·s)、0.08 L/(mmol·s) 和0.08 L/(mmol·s)。

    Abstract:

    A N-acetylneuraminate lyase gene (shnal) from Staphylococcus hominis was cloned into pET-28a and expressed in Escherichia coli BL21 (DE3) host cells. The recombinant enzyme was purified and characterized. It is a homotetrameric enzyme with the optimum pH at 8.0 for the cleavage direction and the optimum pH and temperature were 7.5 and 45 °C for the synthetic direction. The activity of ShNAL is stable when incubated at 45 °C for 2 h but decreased rapidly over 50 °C. ShNAL showed high stability in a wide range pH from 5.0 to 10.0 with the residual activity being >70% when the enzyme was incubated in different buffers at 4 °C for 24 h. Its Km towards N-acetylneuraminic acid, pyruvate and ManNAc were (4.0±0.2) mmol/L, (35.1±3.2) mmol/L and (131.7±12.1) mmol/L, respectively. The kcat/Km value of Neu5Ac, ManNAc, and Pyr for ShNAL were 1.9 L/(mmol·s), 0.08 L/(mmol·s) and 0.08 L/(mmol·s), respectively.

    参考文献
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引用本文

周传华,陈曦,冯进辉,肖冬光,吴洽庆,朱敦明. 来源于葡萄球菌的N-乙酰神经氨酸裂合酶的基因克隆及性质[J]. 生物工程学报, 2013, 29(4): 480-489

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  • 收稿日期:2012-09-19
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  • 在线发布日期: 2013-04-03
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