科微学术

生物工程学报

首页 > 过刊浏览>2019年第35卷第6期 >1117-1125. DOI:10.13345/j.cjb.190011
PDF HTML阅读 XML下载 导出引用 引用提醒
大肠杆菌FtsZ蛋白原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定
作者:
作者单位:

作者简介:

通讯作者:

中图分类号:

基金项目:

国家自然科学基金 (Nos. 81503065，81703546)，安徽省自然科学基金 (No. 1808085QH265)，吉林省科技发展计划 (No. 20160520045JH)，皖南医学院博士科研启动基金 (No. RCQD201617)，皖南医学院大学生科研资助金 (No. WK2018S54) 资助。


Bacterial expression, preparation and identification of polyclonal antibody against Escherichia coli FtsZ
Author:
Affiliation:

Fund Project:

National Natural Science Foundation of China (Nos. 81503065, 81703546), Anhui Provincial Natural Science Foundation (No. 1808085QH265), Jilin Scientific and Technological Development Program (No. 20160520045JH), The Doctoral Starting-up Fund of Wannan Medical College (No. RCQD201617), College Student Innovation Fund of Wannan Medical College (No. WK2018S54).

  • 摘要
    • |
  • 图/表
    • |
  • 访问统计
    • |
  • 参考文献
    • |
  • 相似文献
    • |
  • 引证文献
    • |
  • 资源附件
    • |
  • 文章评论
    摘要:

    为制备特异性抗大肠杆菌丝状热敏蛋白Z (Escherichia coli filamentous thermosensitive protein Z，Ec-FtsZ)多克隆抗体，将Ec-FtsZ基因进行化学合成后连接pET-22b(+) 表达载体，构建重组质粒Ec-FtsZ-pET-22b(+)。将重组质粒转化到大肠杆菌E. coli BL21(DE3) 中进行Ec-FtsZ原核表达与表达条件优化，以HisTrap层析柱进行Ec-FtsZ的分离纯化，再以孔雀绿法进行Ec-FtsZ GTPase (Guanosine triphosphatase) 活性测定。使用纯化的Ec-FtsZ为抗原免疫大鼠制备多克隆抗体，经酶联免疫吸附测定实验 (Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)、Western blotting实验和免疫荧光实验鉴定，抗Ec-FtsZ多克隆抗体效价可达1∶256 000且具有良好的抗原特异性。抗Ec-FtsZ多克隆抗体的成功制备为Ec-FtsZ生物学功能研究和生化检测奠定了实验基础。

    Abstract:

    To prepare polyclonal antibody (PcAb) against Escherichia coli filamentous thermosensitive protein Z (Ec-FtsZ), the artificially synthesized gene fragment coding Ec-FtsZ was subcloned into pET-22b(+) plasmid, and Ec-FtsZ protein was expressed in E. coli BL21(DE3) cell under an optimal bacterial expression condition. Then Ec-FtsZ protein was purified by HisTrap affinity chromatography, and the GTPase (Guanosine triphosphatase) activity of purified Ec-FtsZ protein was further analyzed by malachite green assay. Subsequently, the purified Ec-FtsZ protein was used to immunize rat subcutaneously for preparation of anti-Ec-FtsZ PcAb. The results of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Western blotting analysis and immunofluorescence assay showed that the titer of PcAb was 1:256 000, and PcAb exhibited a perfect antigenic specificity against purified and endogenous Ec-FtsZ protein. All these data indicated that the anti-Ec-FtsZ PcAb is successfully prepared, which can be used for further cellular function study and biochemical analysis of Ec-FtsZ protein in vivo.

    参考文献
    相似文献
    引证文献
引用本文

陈云雨,牛夏忆,李淼,李霓,刘晓平. 大肠杆菌FtsZ蛋白原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定[J]. 生物工程学报, 2019, 35(6): 1117-1125

复制
分享
文章指标
  • 点击次数:
  • 下载次数:
  • HTML阅读次数:
  • 引用次数:
历史
  • 收稿日期:2019-01-06
  • 最后修改日期:
  • 录用日期:
  • 在线发布日期: 2019-06-21
  • 出版日期:
您是第位访问者
生物工程学报 ® 2024 版权所有

通信地址：中国科学院微生物研究所    邮编：100101

电话：010-64807509   E-mail：cjb@im.ac.cn

技术支持：北京勤云科技发展有限公司