快速鉴定格尔德霉素产生菌——吸水链霉菌17997中的洋橄榄叶素
Rapid identification of elaiophylin from Streptomyces hygroscopicus 17997, a geldanamycin producer
投稿时间:2010-09-25  
DOI:  
中文关键词:吸水链霉菌17997,洋橄榄叶素,液相色谱-质谱联用 (LC-MS),dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶,格尔德霉素
英文关键词:Streptomyces hygroscopicus 17997, elaiophylin, liguid chromatography-mass spectrometry (LC-MS), dTDP- glucose-4,6-dehydratase, geldanamycin
基金项目:科技部“重大新药创制”科技重大专项 (No. 2009ZX09501-008) 资助。
作者单位E-mail
李书芬 中国医学科学院/北京协和医学院 医药生物技术研究所 卫生部抗生素生物工程重点实验室北京 100050  
武临专 中国医学科学院/北京协和医学院 医药生物技术研究所 卫生部抗生素生物工程重点实验室北京 100050 wulinzhuan@yahoo.com.cn 
陈菲菲 中国医学科学院/北京协和医学院 医药生物技术研究所 卫生部抗生素生物工程重点实验室北京 100050中国医药集团四川抗菌素工业研究所成都 610052  
王红远 中国医学科学院/北京协和医学院 医药生物技术研究所 卫生部抗生素生物工程重点实验室北京 100050  
孙桂芝 中国医学科学院/北京协和医学院 医药生物技术研究所 卫生部抗生素生物工程重点实验室北京 100050  
王以光 中国医学科学院/北京协和医学院 医药生物技术研究所 卫生部抗生素生物工程重点实验室北京 100050  
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中文摘要:
      对格尔德霉素产生菌吸水链霉菌17997的发酵液乙酸乙酯提取物进行了硅胶板TLC 初步分离和NaOH溶液喷涂显色,对显红色、具有抗革兰阳性菌活性的条带进行了HPLC分析,提示抗革兰阳性菌活性化合物可能为大环二内酯类抗生素洋橄榄叶素;以dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶 (Tgd) 基因保守区设计PCR引物,扩增了吸水链霉菌17997基因组DNA中的tgd并进行了序列分析,表明吸水链霉菌17997含有洋橄榄叶素生物合成基因簇中的tgd基因;对NaOH溶液喷涂显红色的化合物进行LC-(+)-ESI-MS分析,证实
英文摘要:
      To identify the anti-bacterial compound(s) from Streptomyces hygroscopicus 17997, a geldanamycin producer, silica gel thin layer chromatography (TLC) TLC was used to separate the secondary metabolites of S. hygroscopicus 17997. Compound(s) from the silica gel TLC with anti-Gram positive bacteria activity and becoming red upon color reaction by 2.0 mol/L NaOH was analyzed by HPLC. The UV absorption profile and the retention time of a peak of HPLC were identical to those of authentic elaiophylin. A conserved region of dTDP-glucose-4,6-dehydratase (Tgd) gene was amplified by PCR from the genomic DNA of Streptomyces hygroscopicus 17997. DNA sequence analysis of the amplified DNA fragment indicated that it should be the tgd gene of elaiophylin biosynthetic gene cluster. These results implied that the compound in the peak of HPLC was elaiophylin, a macrodiolide antibiotic. The compound was then confirmed to be elaiophylin by LC-(+)-ESI-MS, which revealed that Streptomyces hygroscopicus 17997 was an elaiophylin producer. At the same time, a fast procedure, which consisted of silica gel TLC, color reaction, HPLC, PCR detection and DNA sequence analysis of tgd gene, and LC-(+)-ESI-MS, was established for rapid identification of elaiophylin and its producer.
李书芬,武临专,陈菲菲,王红远,孙桂芝,王以光.快速鉴定格尔德霉素产生菌——吸水链霉菌17997中的洋橄榄叶素[J].生物工程学报,2011,27(7):1109~1114
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