黑曲霉果胶裂解酶基因毕赤酵母在Pichia pastoris GS115中的表达
Expression of a pectin lyase A gene from Aspergillus niger in Pichia pastoris GS115
投稿时间:2009-09-23  
DOI:  
中文关键词:黑曲霉, 果胶裂解酶, 毕赤酵母, 表达
英文关键词:Aspergillus niger, pectin lyase, Pichia pastoris GS115, expression
基金项目:国家自然科学基金项目(No. 30800735), 福建省自然科学基金项目(No. 2008F3036)资助。
作者单位E-mail
强慧妮 福建师范大学 工业微生物教育部工程研究中心, 生命科学学院 福建省现代发酵技术工程研究中心, 福州 350108  
杨欣伟 福建师范大学 工业微生物教育部工程研究中心, 生命科学学院 福建省现代发酵技术工程研究中心, 福州 350108  
田宝玉 福建师范大学 工业微生物教育部工程研究中心, 生命科学学院 福建省现代发酵技术工程研究中心, 福州 350108  
柯崇榕 福建师范大学 工业微生物教育部工程研究中心, 生命科学学院 福建省现代发酵技术工程研究中心, 福州 350108  
林伟铃 福建师范大学 工业微生物教育部工程研究中心, 生命科学学院 福建省现代发酵技术工程研究中心, 福州 350108  
吕睿瑞 福建师范大学 工业微生物教育部工程研究中心, 生命科学学院 福建省现代发酵技术工程研究中心, 福州 350108  
黄薇 福建师范大学 工业微生物教育部工程研究中心, 生命科学学院 福建省现代发酵技术工程研究中心, 福州 350108  
王春香 福建师范大学 工业微生物教育部工程研究中心, 生命科学学院 福建省现代发酵技术工程研究中心, 福州 350108  
黄建忠 福建师范大学 工业微生物教育部工程研究中心, 生命科学学院 福建省现代发酵技术工程研究中心, 福州 350108 hjz@fjnu.edu.cn 
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中文摘要:
      利用RT-PCR技术从黑曲霉(EIM-6)中扩增得到去除信号肽的果胶裂解酶基因A, 将其插入到毕赤酵母表达载体pPIC9k上, 构建重组表达质粒pPIC9K-pelA, 电击转化毕赤酵母 GS115, 得到了表达成功的工程菌株。用终浓度为1.5%的甲醇对其进行诱导, 将发酵上清液浓缩后, 用盐酸法测定其酶活可以达到2.3 U/mL。通过对重组毕赤酵母诱导表达产物进行SDS-PAGE鉴定, 发现重组毕赤酵母分泌了1个约38 kD的蛋白, 与该酶基因产物的理论值相符, 并通过水解圈法测定验证, 均说明果胶裂解酶得到正确的分泌表达.
英文摘要:
      In this study, the mature peptide sequence of a pectin lyase gene A was amplified from Aspergillus niger strain EIM-6 by using RT-PCR reverse transcription technique. The cloned gene was then inserted into a Pichia pastoris expression vector pPIC9k to produce the recombinant expression plasmid pPIC9K-pelA. By using electric shocks, we successfully transformed the recombinant pPIC9K-pelA into Pichia pastoris GS115. The activity of the engineered strain reached to 2.3 U/mL after induction with the final concentration of 1.5% methanol. SDS-PAGE analysis r evealed that the pPIC9K-pelA transformant had an additional protein band of approximately 38 kD, which was not present in the control. There were no significant differences between the recombinant and native pectin lyase with regard to their hydrolysis activities.
强慧妮,杨欣伟,田宝玉,柯崇榕,林伟铃,吕睿瑞,黄薇,王春香,黄建忠.黑曲霉果胶裂解酶基因毕赤酵母在Pichia pastoris GS115中的表达[J].生物工程学报,2009,25(12):1962~1968
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