利用DNA Shuffling技术构建重组PRRSV ORF5基因
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福建省科技重大专项项目 (No. 2014NZ0002-3),福建省自然科学基金 (No. 2016J01168) 资助。


Construction of recombinant PRRSV ORF5 gene by DNA shuffling technique
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Major Project of Science and Technology Program of Fujian Province, China (No. 2014NZ0002-3), Natural Science Foundation of Fujian Province, China (No. 2016J01168).

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    摘要:

    通过DNA shuffling技术对PRRSV ORF5基因进行改组,研究其对异源毒株交叉中和能力。将获得的嵌合基因△2ORF5与载体pET-32a连接,转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21中,经诱导表达获得约42 kDa重组蛋白。将纯化的重组△2ORF5蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,Western blotting试验表明其与4株亲本毒株重组ORF5蛋白具有良好的反应性。病毒感染抑制试验结果表明,多克隆抗体对4株亲本毒株具有较高的抑制率 (>53%)。研究结果为研制新型PRRSV疫苗奠定了基础。

    Abstract:

    Recombinant PRRSV △2ORF5 gene was constructed using DNA shuffling from four genetically different strains of PRRSV to study its heterologous cross-neutralizing ability. The △2ORF5 mutant gene was cloned into the vector pET-32a and transferred into E. coli BL21. SDS-PAGE confirmed that the molecular weight of the recombinant △2ORF5 was about 42?kDa, consistent with the predicted result. Then the purified recombinant protein was injected into BALB/c mouse to obtain polyclonal antibody. Western blotting analysis with mouse-anti-△2ORF5 polyclonal serum indicated that the parental virus recombinant GP5 protein reacted with the specific antibodies. Four parental viruses could be inhibited by the anti-△2ORF5 polyclonal antibody and the inhibition rates were higher than 53%. This work has laid a foundation for further development vaccine for PRRSV.

    参考文献
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    引证文献
引用本文

刘建奎,魏春华,黄春芳,陈小燕,戴爱玲,杨小燕. 利用DNA Shuffling技术构建重组PRRSV ORF5基因[J]. 生物工程学报, 2018, 34(6): 888-896

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  • 收稿日期:2017-11-15
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  • 在线发布日期: 2018-06-20
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